PCR анализ за хепатит В

ДНК вирусът от семейство Hepadnaviridae е директен причинител на хепатит В. PCR анализът на хепатит В позволява да се открие наличие на инфектиран ДНК вирус в кръвта на пациента. Резултатът от положителен тип на HBV ДНК показва наличието на инфекция в кръвта на пациента. Трябва да се отбележи, че диагнозата чрез използване на PCR анализ позволява не само да се определи наличието на инфекция, но и нейното количествено натоварване и активност. Този метод е надежден, точен и възпроизводим. Количественото определяне на HBV ДНК с qPCR може да се използва за наблюдение на ефективността на HBV терапията и да бъде полезно за разбиране на естествената история на HBV в ендемична област.

Процесът на инфекция с хепатит В възниква чрез домашен или сексуален контакт - чрез пряк контакт със заразена кръв. След заразяването вирусът навлиза в чернодробните клетки, в които продължава активното си възпроизвеждане. Чрез кръвообращението патогенните клетки се разпространяват в цялото тяло. Заслужава да се отбележи, че хепатит В клетките са силно устойчиви на киселини и високи температури. Той е в състояние да поддържа своите вредни свойства в продължение на шест месеца.

Видове PCR за хепатит В

Към днешна дата има два вида диагностика, които се предписват, ако подозирате наличието на вируса на хепатит В: качествена PCR (позволява да се определи със 100% точност наличието на вируса в кръвта) и количествена PCR (позволява да се определи степента на вирусната активност).

Висококачествена PCR се предписва, ако има съмнение за HBV инфекция или ако други диагностични методи не дават ясни резултати. Този вид PCR анализ е изключително лесен за дешифриране: отрицателен (не се открива вирус в кръвта), положителен (вирус открит в кръвта). Основната задача на качествения анализ е да се определи наличието на инфектирани клетки в ранните стадии на заболяването. Ако вирусът е диагностициран две седмици след предполагаемата инфекция, ефективността на лечението ще бъде много по-висока. Ако вирусът в кръвта е около два месеца, заболяването става хронично, следователно не може да бъде напълно излекувано.

Ако качествена диагноза потвърди наличието на HBV в кръвта, лекарят предписва количествен анализ.

Количественият анализ позволява да се определи активността на развитието на вируса в тялото на пациента. Този вид PCR анализ се възлага на:

• за определяне на стадия на заболяването;
• да наблюдава ефективността на прилаганата терапия;
• да се определи нивото на резистентност на вируса към конкретно лекарство;
• за избор на лекарства.

Количествените показатели на вируса в кръвта се измерват в IU на милилитър или ДНК на милилитър.

Ако лекарят предпише незабавно количествена диагноза, без да проверява качественото, тогава 75 IU на милилитър се считат за норма. Ако бъдат открити по-малко международни единици, резултатът е, че HBV не се открива, когато цифрите са над нормалните, диагностицира се наличието на вирусен хепатит В.

Интерпретация на количествената диагноза

Следните показатели (в копия / милилитър) се считат за норма на CRP при хепатит В: по-малко от 10 3 - неактивен вирус; от 10 4 до 10 5 - вирусът обикновено е неактивен; - активен вирус; 10 7 - вирус във висок стадий на активност.

Въз основа на количествени показатели с 100% точност може да се определи формата на заболяването (носител, остър или хроничен), реакцията на вируса към лечението, необходимостта от допълнителна диагностика.

Хроничната форма на хепатит В се установява, ако активността на вируса е 10 5 копия на милилитър. Носителят се диагностицира, ако резултатите са под 10 5 копия на милилитър.

През периода на лечение е необходимо редовно (веднъж на всеки три месеца) да се повтори количествената диагностика, за да се вземе под внимание времето, когато вирусът развива имунитет към използваните лекарства и променя метода. Ако всички проучвания са проведени правилно и е избрано ефективно лечение, повторният анализ (след тридневно лечение) ще покаже намаляване на активността на патогенните клетки с най-малко осемдесет и пет процента.

Биопсия на черния дроб се извършва само в случаите, когато шест месеца лечение показват, че нивата на ALT са два пъти по-високи от нормалните, а PCR диагностиката показва стойности под 10 5 копия на милилитър кръв.

Подготовка за проучването

За анализ е необходима венозна кръв. За да получите най-точни резултати, е необходимо да се подготвите за процедурата: да откажете храна поне осем часа преди вземането на кръв; за два дни да откаже лечение с наркотици (задължително е да предупреди лекаря за приемането на лекарствата); трябва да прекарате двадесет минути в режим на почивка преди да дарите кръв; Дванадесет часа преди процедурата се откажете от спортни упражнения, алкохолни напитки, пушене и ядене на мазни храни.

Важно е: ако диагнозата е необходима за дете на възраст под пет месеца, тогава той трябва да дава чаша преварена вода на всеки десет минути преди процедурата за вземане на кръв.

Обобщава

PCR анализът за хепатит В днес е най-точният метод за диагностициране на вирус. Методът позволява да се определят мутиралите и скрити форми на заболяването, да се диагностицира заболяването в първите дни на инфекцията, следователно да се избере най-ефективното лечение. Лабораторният асистент сравнява резултатите от анализа с нормата и след това ги привежда в заключение. Данните се обработват в рамките на две седмици. За да получите препоръка за PCR анализ, е необходимо да се свържете с хепатолог, специалист по инфекциозни заболявания или вирусолог. Важно е да запомните, че колкото по-скоро стигнете до лекаря, толкова по-бързо ще се получат резултатите, следователно, толкова по-ефективно ще бъде лечението.

Разходите за изследване на кръвта и PCR за хепатит С

Хепатит С е възпалителна патология, при която са засегнати чернодробните клетки. Заболяването се развива в резултат на проникването на вируса на хепатит С (HVC) в човешкото тяло.

Формата на заболяването може да бъде остра или хронична.

Най-често симптомите на острата форма на патология при повечето пациенти отсъстват, понякога болестта е придружена от болезнени усещания в корема, намалена работоспособност, повишена умора, загуба на апетит, тъмен оттенък на урината, промяна в цвета на изпражненията, жълтеност на кожата и лигавиците, ставни болки. Такива симптоми обикновено се появяват 6-8 седмици след инфекцията, но могат да се появят след шест месеца.

С развитието на такива явления е необходимо да се свържете с лечебно заведение и да се подложите на цялостен преглед на целия организъм. Кръвен тест за хепатит С се извършва като част от медицински преглед.

Днес, с помощта на съвременни диагностични техники, тази патология може да бъде идентифицирана в началния етап на развитие, което значително увеличава шансовете за пълно излекуване на заболяването.

Следните групи от хора са длъжни да изследват за хепатит С:

• жени в периода на пренасяне на дете;
• лица с признаци на хепатит;
• медицински персонал;
• потенциални органи и донори на кръв;
• наркомани, ХИВ-инфектирани лица, безразборен интимен живот.

Списък на необходимите проучвания

Какви тестове трябва да взема за хепатит С? За точно диагностициране на заболяването, идентифициране на причините за него и определяне на състоянието на чернодробния паренхим са необходими следните изследвания:

• общи урина и кръвни тестове;
• биохимичен анализ на кръв;
• PCR анализ;
• кръвен тест за откриване на антитела към HVC;
• кръвен тест за налични антитела към собствените му чернодробни клетки;
• чернодробна биопсия.

Разчитането на кръвен тест за хепатит С се извършва от специалист. Разгледайте всеки метод на изследване по-подробно, както и ще разберем кой анализ на хепатит С е най-точен.

Общ анализ

Когато извършвате пълна кръвна картина за хепатит С, можете да оцените състоянието на пациента. Промените в кръвните параметри не се възприемат като специфични симптоми на хепатит, но при това заболяване има такива нарушения като:

• намалява концентрацията на хемоглобин, тромбоцити и левкоцити;
• увеличава съдържанието на лимфоцити;
• нарушава се съсирването на кръвта;
• скоростта на утаяване на еритроцитите (ESR) се увеличава.

Общ анализ на урината дава възможност да се открие в състава си уробелин - жлъчен пигмент, който се появява в урината в резултат на нарушено функциониране на черния дроб.

Биохимичен анализ

Биохимичният анализ на кръвта при хепатит С дава възможност да се идентифицират такива нарушения като:

• повишени нива на чернодробните ензими (аланин трансаминаза - ALT и аспартат аминотрансфераза - AST), които влизат в кръвта, когато хепатоцитите са повредени. В нормално състояние, тези показатели за мъжете не трябва да бъдат повече от 37 IU / l, за жени - не по-високи от 31 IU // l. Повишената концентрация на ALT и AST при асимптоматичен хепатит С често е единственият симптом на това заболяване. Освен това се увеличава алкалната фосфатаза в кръвната глутамил транспептидаза (обикновено не по-висока от 150 IU / l).
• превишава се съдържанието на билирубин (общ и директен) в кръвта. Ако нивото на жълтия пигмент в серума превишава 27-34 µmol / l, настъпва жълтеница (до 80 µmol / l в лека форма, 86-169 µmol / l при умерено тежка, над 170 µmol / l в тежка форма).
• Нивото на албумин се понижава, а напротив, концентрацията на гама глобулини се увеличава. Гама глобулините се състоят от имуноглобулини - антитела, които предпазват тялото от вещества, причиняващи болести.
• повишена концентрация на триглицериди в кръвта.

PCR тест

Използвайки PCR техниката, е възможно да се диагностицира причинителя на заболяването. Извършването на този анализ дава възможност да се открие вирус в кръвта, дори ако неговото количество е минимално. PCR анализът за хепатит С дава възможност да се определи съществуваща инфекция в кръвта още след 5 дни от момента на инфекцията, т.е. много преди появата на антитела.

Ако резултатът от кръвен тест за хепатит С чрез PCR е положителен, това показва наличието на активна инфекция в организма. Използвайки този метод, можете да проведете качествено и количествено изследване на HVC RNA.

По време на качествения анализ на PCR за хепатит C е възможно да се открие съществуващ вирус в човешкото тяло.

Тази диагностична процедура се извършва, ако в кръвта се открие анти-HVC.

Дешифрирането на анализа за хепатит С съдържа информация, че инфекцията е открита или не е открита в организма. Обикновено в кръвта не се откриват патологични вещества.

Ако тестът за хепатит С е положителен, това означава, че патогенът непрекъснато се дели и инфектира чернодробните клетки.

Резултатите от този анализ могат да бъдат ненадеждни, възможно е в следните случаи:

• използван замърсен биоматериал;
• в присъствието на хепарин в кръвта;
• в присъствието на химични или протеинови вещества (инхибитори) в изследваните биоматериали, засягащи елементите на PCR.

Количественият анализ на хепатит С дава информация за количеството вирус, съдържащ се в кръвта, т.е. определя вирусния товар. Под тази концепция се разбира обемът на HVC RNA, присъстващ в кръвта (например, в 1 ml). При тълкуването на количествения анализ на хепатит С тази стойност се изразява в цифров еквивалент, измерен в IU / ml.

Кръв за PCR за хепатит С се взема преди терапевтични мерки. След анализ се извършва на 1, 4, 12 и 24 седмици. Проучването на седмица 12 е индикативно и се провежда за оценка на ефективността на терапевтичните процедури.

Ако тестът за хепатит С по време на бременност е положителен и стойностите на вирусния товар са надвишени, рискът от предаване на патогени от болната майка на детето се увеличава няколко пъти. Също така, при повишен вирусен товар, прилагането на терапевтични мерки е трудно.

Според преписа на тестовете за хепатит С, ако стойностите на вирусното натоварване надвишават 800 000 IU / ml, то тогава е високо. Ако цифрите са под 400 000 IU / ml, нивото на вирусното натоварване се счита за ниско.

Анализът на хепатит С чрез PCR се счита за най-точен и има няколко предимства пред други изследователски възможности, а именно:

• директна диагноза на причинителя на заболяването. При извършване на традиционни изследвания се определя от наличието на протеинови маркери, които са отпадъчни продукти от патогени. Това само показва, че инфекцията присъства в кръвта. При изследване за хепатит С чрез PCR е възможно да се определи вида на патогена на опасната патология.
• специфичност на техниката. По време на тази процедура в биоматериала се определя уникална ДНК област, която съответства само на един вид патоген. Това минимизира вероятността от фалшиви резултати.
• висока чувствителност. Когато извършвате PCR анализ, можете да откриете минималното количество вирус. Това е важно, ако се идентифицират условно патогенни вещества, които представляват заплаха само ако тяхното ниво се увеличи.
• Когато се използва тази техника в една проба от биоматериал, няколко патогени могат да бъдат открити веднага.
• може да открие скрити инфекции. В допълнение, анализът ви позволява да диагностицирате патогенни микроорганизми, които живеят в клетките и имат висока антигенна вариабилност.

Ако резултатите от теста са положителни, тогава в биоматериала се откриват следи от вируса, след което мрежата има инфекция в тялото.

Отрицателен PCR анализ за хепатит С означава, че няма следи от инфекция в биоматериала.

Имунологично изследване

Този метод ви позволява да идентифицирате антитела за всички видове вируса на хепатита, както и антитела към чернодробните клетки на собственото ви тяло, чийто вид допринася за развитието на автоимунен хепатит.

Резултатите, получени по време на проучването са валидни в продължение на 3 месеца, след това трябва да се дари отново кръв за хепатит С.

Също така е възможно да се извърши експресно проучване с помощта на специални тест ленти. Този анализ дава възможност да се определят антитела срещу вирус С в състава на кръвта и слюнката.Тази процедура може да се извърши самостоятелно, у дома.

Чернодробна биопсия

За извършване на този анализ се взема елемент от паренхима на черния дроб и се извършва хистологично изследване на получения биоматериал. Това ви позволява да оцените състоянието на организма: да се идентифицират възпалителни, некротични огнища, стадий на фиброза и т.н.

Днес се използват тестове, които заменят хистологичния анализ на чернодробния паренхим.

За оценка на стадия на увреждане на черния дроб и интензивността на възпалителния процес се използват специфични венозни биомаркери на кръвта. Използвайки Fibrotest, можете да оцените степента на растеж на фиброзната тъкан.

При извършване на Actitest можете да получите информация за интензивността на патологичните процеси в чернодробния паренхим. Използването на Steatototesta може да диагностицира мастната тъкан на черния дроб и да оцени степента на този процес. Fibromax се състои от всички изброени по-горе тестове и може да включва някои други изследвания.

Подготовка за изследването

Какви тестове се вземат за хепатит С и как сме открили този или онзи вид изследване. Също толкова важно е да се знае как да се подготви за анализа.

За да се получат надеждни резултати, се препоръчва да се спазват следните изисквания:

• Тестовете за хепатит С трябва да се правят сутрин на празен стомах. Последният път храната трябва да се консумира най-малко 8 часа преди проучването.
• Биоматериалът може да бъде събран през деня или вечерта. В този случай е важно поне 5-6 часа да минават между последното хранене и анализа.
• преди да дарите кръв за хепатит С, чай, кафе, сок или други напитки трябва да се изхвърлят, да се допуска само вода.
• 48 часа преди изследването е необходимо да се изключи употребата на мазни, пържени храни и алкохолни напитки.
• поне за час преди анализа трябва да се въздържате от пушене.
• Анализът не трябва да се извършва веднага след ултразвуково, инструментално, рентгеново изследване, масаж или физиотерапия.
• един ден преди провеждането на проучването е необходимо да се изключи употребата на наркотици и интензивна физическа активност. Емоционалният стрес е противопоказан.
• Препоръчително е да прекарате 15 минути преди провеждане на изследването в спокойно състояние.

Провеждане на процедурата за събиране на кръв

Къде да се изследва за хепатит С? Биоматериалът се взима за по-нататъшно разследване в лабораторията на медицинска институция или в дома на пациента.

Кръв от вена се приема, както следва:

• с помощта на специална турникет, увита около ръката на пациента, венозният кръвен поток се спира. Благодарение на такива манипулации, вените ще бъдат пълни с кръв и ще бъдат по-видими, което значително ще улесни процеса на поставяне на иглата.
• зоната на кожата, където ще бъде поставена иглата, се третира внимателно с алкохол или течност, съдържаща алкохол.
• Иглата се поставя внимателно във вената, след което към нея се прикрепя епруветка, специално предназначена за събиране на кръв.
• Веднага след като иглата е вкарана във вената, притискащата сбруя се отстранява от рамото на пациента.
• след като обемът на кръвта, необходим за анализа, се събере, иглата внимателно се отстранява от вената.
• На мястото на инжектиране трябва да се нанесе стерилен памучен тампон или марля, напоен с алкохол.
• за да се предотврати появата на хематом, тампонът трябва да се натисне с известно усилие срещу областта на вмъкване на иглата, огънете ръката в лакътната става и го задръжте в това положение в продължение на няколко минути. Такива действия също ще помогнат да се спре кръвта по-бързо.

При условие, че техниката на вътрешно приложение е добра, тази процедура е абсолютно безопасна и не причинява болезнени усещания.

В редки случаи, след вземане на кръв, вените могат да набъбнат. Това явление се нарича "флебит". Компрес (не горещ) ще помогне за решаването на проблема, той трябва да се прилага върху подути участъци от кожата няколко пъти на ден.

Някои проблеми също могат да възникнат, ако има нарушение на кървенето. Приемът на аспирин, варфарин и други разредители за кръв може да причини кървене. Ето защо преди извършване на анализа е необходимо да откажете да приемате каквото и да е лекарство. Ако лечението не може да бъде отменено, трябва да информирате специалиста.

Дати и цени

Колко се изследва за хепатит С? Резултатите от кръвен тест за хепатит могат да бъдат готови за няколко часа и след няколко дни (обикновено не повече от 8 дни). Продължителността на подготовката на резултатите зависи от вида на вируса и избрания метод за анализ. По-бързо е изследването, проведено по метода на PCR. Резултатите в този случай ще бъдат готови само за няколко часа.

Колко струва изпитването за хепатит С? В зависимост от клиниката и сложността на проучването, цената на процедурата може да варира от 400 до 11 000 рубли.

Трябва да знаете, че може да отнеме няколко седмици, за да се образува достатъчно количество антитела срещу HVC. Следователно, на ранен етап от развитието на патологията, резултатът от изследването може да бъде фалшиво-отрицателен.

В допълнение, получаването на ненадеждни данни е възможно при лошо качество на анализа и нарушаване на условията за транспортиране на получения биоматериал (пробите трябва да бъдат доставени в лабораторията максимум 2 часа след вземането на кръв).

Ако резултатът от проучването е положителен, трябва незабавно да се свържете с лекар по инфекциозни заболявания. Специалистът ще извърши допълнително изследване и ще предпише подходящо лечение.

Същността на анализа на PCR за хепатит B и неговите резултати

Вирусният хепатит В се лекува успешно, ако е открит навреме и броят на антителата и антигените в кръвта на пациента е правилно определен. С помощта на ензимен имуноанализ за хепатит е възможно да се открие наличието на вирусни маркери, но те не могат да определят точния етап на процеса.

За количествена оценка се използва PCR диагностика. С помощта на теста е възможно да се преброи броя на маркерите, да се предвиди хода на заболяването и вероятността от излекуване с помощта на антивирусни лекарства.

Основното предимство на изследването е способността да се открият дори минимални концентрации на вируса, за да се идентифицира патогенът на видовия етап.

Диагностика на хепатит В

Вирусът на хепатит В е силно заразен и устойчив на външни влияния. Той остава активен в кръвта на пациента в продължение на няколко седмици. Следователно, всеки човек е изложен на риск от инфекция, дори ако се наблюдава профилактика.

За диагностициране на заболяването се предписват следните изследвания:

Същността на PCR метода

Американският химик К.Мулис получи Нобелова награда и неговият диагностичен метод все още се използва.

Предшественик на PCR метода (полимеразна верижна реакция) се счита за учен от Норвегия H. Kleppe. Първоначално той започва да извършва усилване (възстановяване) на ДНК, използвайки къса верига от ДНК, т.е. синтетичен грунд (вид копие).

Ученият обаче не успя да реализира идеята си. Подобни проучвания са направени от американския химик К. Мюлис, който през 1993 г. получава Нобелова награда за изобретението си. Оттогава се използва PCR за установяване на бащинство, диагностика на генетични заболявания и откриване на вируси.

Същността на реакцията е, че с помощта на ензими се копира определена част от ДНК. Можете да копирате само областта, която съответства на посочените параметри и дали е в представената извадка. За започване на реакцията се използват следните компоненти:

1. Матрична ДНК с място за копиране.
2. Праймерите са сходни по структура с ДНК.
3. Полимераза, т.е. ензимът, който задейства реакцията. Тя трябва да бъде термоустойчива, т.е. да издържа на температурни крайности.
4. Разтвор с определени параметри, осигуряващ преминаването на реакцията.

Реакцията се провежда на няколко етапа:

За откриване на хепатит В се използват два вида реакции: количествен и качествен.

Количествен PCR

Количественият метод определя количеството на HBV генома

Количествената PCR включва едновременно създаване на копия на ДНК фрагменти и определяне на броя на молекулите. Измерването се извършва след всеки етап, т.е. в реално време. Това се постига чрез използване на флуоресцентни сонди, които са включени във верига от молекули и светят в определен период от изследването.

Този метод се използва за откриване на ДНК фрагменти, които са маркери на хепатитния вирус. С помощта на количествения метод е възможно точно да се изолира генотипа на вируса. С други думи, изчислява се броят на копията на HBV генома на брой клетки на пациент.

Количественият анализ дава отговори на следните въпроси:

1. С каква интензивност болестта прогресира.
2. Колко ефективно е лечението.
3. Развила се лекарствената резистентност?

Също така, количественото измерване е необходимо за диагностицирането на хроничния стадий на инфекцията. Ако количеството на ДНК е под 100 бр / мл при нормално ниво на трансаминаза, тогава лицето е носител на вируса.

В острата фаза количеството на антителата е много по-високо, а при антивирусното лечение увеличаването на броя на антителата показва развитието на лекарствена резистентност, което е сигнал за коригиране на лечението.

PCR с високо качество

Висококачествената PCR дава по-малко информация, но може да елиминира инфекцията.

Висококачествената PCR може само да установи наличието на патоген в кръвта. Ако те липсват, пациентът не е заразен, ако патогенът влезе в кръвта, резултатът ще бъде положителен.

Въпреки това, с помощта на качествена реакция е невъзможно да се изясни геномът на вируса, стадия на заболяването. Следователно, за диагностициране на HBV се извършва количествено и качествено измерване.

Подготовка за проучването

За анализ на PCR е необходима венозна кръв. Това трябва да се направи сутрин на празен стомах.

Пациентът трябва да се подготви правилно за изследването:

1. За 10 часа да откажете храна, можете да пиете само чиста вода.
2. В навечерието на спрете приема на алкохол, в продължение на 4 часа да не се пуши.
3. Преди преглед трябва да избягвате физически и емоционален стрес.
4. Спрете употребата на лекарства в продължение на 2 дни, ако това не е възможно, е необходимо да уведомите лабораторния техник. Някои лекарства оказват влияние върху крайния резултат.

Тълкуване на данни

В количествена реакция, получените показатели се оценяват в зависимост от броя на ДНК копията.

Лесно е да се интерпретират данните за измерване на качеството. Той дава или положителен или отрицателен отговор.

В количествена реакция е възможно да се оценят получените индикатори в зависимост от броя на ДНК копия. Единица за измерване е копия / ml.

Данните се декодират както следва:

1. Ако количеството на HBV ДНК е по-малко от 90, тогава инфекцията отсъства. Пациентът е развил имунитет след ваксинация или е бил излекуван от заболяването.
2. Когато броят на копията 2x100 говори за носителя на вируса.
3. Числото 2x106 показва хроничен стадий на заболяването.
4. При ДНК повече от 2 х 109 пациентът има остър стадий на хепатит.

Грешни резултати

Предимствата на диагностичния метод при използване на полимеразни реакции са следните:

1. Директно откриване на патогени. За разлика от това, ELISA предоставя информация за наличието на антитела към вируса.
2. Специфика. Това е, че ДНК участъкът присъства в пробата от биоматериал, който се копира.
3. Свръхчувствителност. Методът дори може да открие фрагменти от единични клетки.
4. Диагностика на заболявания в остри и латентни стадии. Това означава, че е възможно да се диагностицира заболяването на етапа на предклиничните прояви.

Методът има недостатъци, които водят до фалшиви резултати. Най-същественият недостатък е вероятността от замърсяване на материала. Основният източник на замърсяване е слабо обработените тръби, лабораторните ръце, реактивите.

Част от ДНК от предишна реакция може да влезе в кръвта. Поради това на лабораториите се налагат повишени санитарни изисквания: отделни помещения, пластмасови тръби, ултравиолетово третиране на лаборатории и др.

Фалшиво негативните резултати могат да се дължат на намалена чувствителност на реакцията. Това се случва в следните ситуации:

• пациентът приема лекарства, например антикоагуланти;
• лицето е претърпяло физически стрес преди анализа (спортни занимания, упорита работа);
• наскоро настъпи инфекция.

Ако пациентът има висока вероятност за инфекция и резултатът от проучването е отрицателен, той трябва да бъде преразгледан.

Вижте също:

заключение

Методът на полимеразната верижна реакция е основният и най-информативен за диагностицирането на HBV. Тя позволява не само да се установи статуса на носителя на инфекцията, но и да се изясни стадия на заболяването, да се оценят резултатите от лечението.

За по-точна диагноза се използва качествено и количествено измерване. Недостатъците на метода включват вероятността от замърсяване, намалена чувствителност и сравнително висока цена.

За да бъдат резултатите най-надеждни, трябва да се подготвите правилно за изследването и да го проведете в клиниката с подходящ лиценз и добра репутация.

Провеждане на PCR анализ за хепатит С и декодиране на резултатите

PCR анализът на хепатит С е изследване, чиято основна цел е да идентифицира генетичния материал на причинителя. Анализът разкрива причинителя на заболяването чрез използване на полимеразна верижна реакция. Тази диагноза има висока степен на точност, специфичност за откриване на липсата или наличието на вирусна инфекция.

Същността на диагнозата

За да се извърши PCR анализ за определяне на вируса на хепатит С от пациент, се взема венозна кръв, която потенциално съдържа РНК (рибонуклеинова киселина) HCV на желания вирус.

PCR тестът за хепатит С предполага процедура за добавяне на кръвните частици на пациента:

• праймери (кратки изкуствено синтезирани региони на необходимия ген);
• специален ензим (РНК полимераза).

След вземането на проби биологичният материал се изпраща за изследване в лабораторията. Една порция кръв е необходима за директен PCR анализ, втората е изпратена за тестване с ELISA. Ензимът може за кратко време да увеличи броя на генетичния материал на вируса на патогена. В специална апаратура се извършват няколко цикъла на топлина и охлаждане. На последния етап полученият материал се сравнява с гените на вируса и се прави заключение за наличието или отсъствието на патология в тялото на пациента.

Същността и провеждането на PCR анализ в лабораторията. Заснет от Сибирска медицинска лаборатория.

Видове изследвания

Има 3 вида диагностика, които позволяват да се определи наличието на вируса на хепатит С в човешкия организъм:

• на генотип;
• на качеството;
• количествен.

Качествен метод

Диагностика на хепатит С с качествен метод е приложима за пациенти, при които са открити антитела към вируса в кръвния тест. В случай на наличие на острата фаза на HCV РНК, такива диагностични мерки могат да определят наличието на заболяването в рамките на 1-2 седмици след инфектирането. През този период може да не се развият антитела срещу хепатит С.

Количествен метод

Използва се количествен диагностичен метод за определяне на концентрацията на вируса в кръвните проби. Такъв тест за виремия (степен на концентрация) позволява точно да се определи броят на единиците вирусна РНК. Крайният резултат се изразява в съответния обем. Ако говорим за количествен анализ, тогава показателите се измерват в 1 мл (1 куб. М).

Параметърът на вирусното натоварване означава нивото на инфекциозност на заболяването, т.е. той отразява степента на "инфекциозност" на пациента. На практика това означава, че колкото по-висока е концентрацията на вируса в кръвта, толкова по-големи са шансовете на пациента да зарази други с хепатит С. Количествен метод за изследване също ви позволява да установите качеството и ефективността на лечението.

определяне на генотипа

Генотипирането разкрива мутации на причинителя на заболяването. Преди да предпише план за лечение, се определя вирусният генотип: от него зависи качеството и продължителността на лечението. Например, при лечението на I-тип заболяване, ефективността е 60%, в случая на II, III-тип - около 80%.

Предимства на PCR анализа на хепатит

Сред основните предимства на процедурата са:

1. Възможността за ранна диагностика. PCR анализът е в състояние да открие наличието на вирус в ранните стадии на инфекцията.
2. Резултати с ниска грешка. Изследваният биологичен ресурс ви позволява да диагностицирате раздел от генетичен материал, който е характерен само за един вид вирусна инфекция. Това обстоятелство позволява да се предотвратят грешни диагностични резултати.
3. Висока степен на чувствителност. PCR анализът е в състояние да открие РНК на вируса в малки количества, което също прави възможно да се проследят латентните инфекции във времето.

Показания за

Необходимо е тестване за PCR за хепатит С, ако е налично:

• контакт с болни хора, което може да доведе до инфекция;
• симптоми на чернодробна цироза (разширяване на далака, нехарактерни промени в размера на черния дроб, откриване на венозен сплит на корема под кожата);
• положителни резултати от ELISA;
• повишена активност на AST и ALT (проявена в биохимичния анализ на кръвта);
• необходимостта да се контролира провеждането на антивирусна терапия;
• началния етап на лечение за необходимостта от установяване на вирусен товар;
• провеждане на последния етап от терапията с цел изключване на възможни рецидиви;
• пациентът има хепатит В, за да изключи развитието на смесено увреждане на черния дроб.

Как да се подготвим за кръводаряване за PCR изследвания

Подготовката за PCR анализ включва следните препоръки:

• сутрин се взема кръв;
• анализът се извършва на празен стомах, така че е препоръчително да се направи почивка между последния прием на храна от 8-10 часа;
• няколко дни преди диагнозата трябва да бъдат изключени мастни, пикантни и пържени храни, алкохолни напитки и пушене;
• един ден преди анализа трябва да се въздържат от тежки физически натоварвания, да се изключат занятията във фитнеса или басейна.

Резултати от анализа: норми и отклонения

Самият анализ не е дългосрочен, а висококвалифицираният специалист хепатолог или специалист по инфекциозни болести декриптира резултатите от PCR за хепатит С. Въз основа на резултатите от анализа пациентът се диагностицира.

За да се коригират правилно резултатите от проучването, те вземат предвид показателите:

• биохимичен анализ на кръв;
• данни от ултразвук;
• резултати от биопсия.

Интерпретация на количествения анализ

При получаване на резултатите от количествения анализ на PCR се вземат предвид следните показатели:

PCR диагностика за хепатит С

Хепатит С е възпаление на чернодробните клетки, което възниква в резултат на инфекция с вируса на HCV (хепатит С) чрез контакт с кръвта на инфектиран човек. Генетичният код на флавивирус HCV се носи от молекула РНК (рибонуклена киселина), съдържаща се в структурата на вируса. Този животозастрашаващ феномен се отличава със секретност в началния етап на патологията. Интервалът от време между инфекцията и началото на симптомите (реакцията на имунната система) може да бъде от един месец до шест месеца. По правило болестта е хронична и е трудно да се излекува.

Съвременната медицина ви позволява да диагностицирате патология с леко увреждане на черния дроб. Най-честите и ефективни диагностични методи включват PCR анализ. Обмислете в тази статия какво е то и какви видове съществуват.

Какво е изследването

PCR анализ за хепатит С е лабораторно изследване, което открива флуирус, генетичния материал на рибонуклененова киселина (РНК). Той определя броя на молекулите на РНК в кръвта, качеството на биологичния материал, генетичния тип HCV flavirus.

PCR методът за хепатит С прави възможно откриването на минималното количество флавирус преди образуването на антитела, като правило, скоро след заразяването.

Изследването често се споменава като РНК анализ, тъй като открива частици рибонуклеинова киселина с размер от 30-60 nm, съдържащи се в флававируса.

Изследването се провежда по следния начин: на празен стомах пациентът дава кръв от вена, която след това се тества с различни методи:

• PCR в реално време се извършва по затворен автоматизиран начин и има долна граница за откриване на РНК вирус, равна на 15 IU / ml;
• COBAS AMPLICOR с чувствителност от 50-100 IU / ml.

Колкото по-висок е прагът на чувствителност на диагностичната техника, толкова по-големи са шансовете за намиране на най-ниското съдържание на вируса в изследвания биологичен материал.

Какви видове анализ се използва

Анализът, който се използва успешно от няколко десетилетия, се нарича PCR хепатит и може да бъде открит много лесно и бързо. В медицината има два метода на реакцията, които се различават фундаментално:

• качествен метод разкрива наличието в биологичния материал на генетичния източник на специфичен вирус;
• количественият анализ измерва броя на генетичните вещества, което позволява да се определи етапа на патологията или да се оцени ефективността на терапевтичния курс;
• генотипирането определя вида на вируса, присъстващ в организма.

Като цяло, кръвен тест помага да се идентифицира естеството на виремията и генетичния тип на патогена. Като правило, изследванията се извършват 1 път в зависимост от степента на чувствителност на диагностичната система. Ако е необходимо, повторното изпитване се извършва с помощта на ултрачувствителен реагент.

PCR с високо качество

Какво е висококачествена PCR РНК за хепатит С? Същността на реакцията е в присъствието на последователността на хепатит RNA и реакцията е възможна само в присъствието на вирусни протеини с подобна етимология в ELISA. В процеса на сравнение се откриват натоварването и възможните увреждания на чернодробната област.

Отличителна черта на този метод е способността да се открие дори наличието на отделен ген.

Трябва да се отбележи, че след получаване на резултатите от PCR и ELISA тестовете, пациентът се нуждае от подходящо лечение, независимо от крайния резултат от имунологичния анализ. Положителният индикатор показва инфекция, а PCR негативът показва намален брой вирусни частици спрямо нивото на чувствителност.

Съществуват няколко условия, които влияят върху производството на отрицателен PCR и ELISA:

• липса на подходящи условия за събиране на материали;
• полученият анализ съдържа замърсяване;
• в случай на ранно инжектиране на хепарин на пациента.

Пациентът не трябва да спазва определени правила за вземане на кръвни проби за PCR анализ, в този случай качеството на този анализ зависи от медицинския специалист, който извършва процедурата. Способността да се установи наличието на заболяването (особено в острата форма) се появява в рамките на няколко седмици след инфектирането.

Количествен анализ

Препоръчва се количествен тест за откриване на вирусното натоварване непосредствено преди образуването на допълнителна терапия и реакцията на организма. Процесът на вземане на кръвни проби се извършва по подобен начин, както при висококачествената PCR и ELISA, единственото условие е липсата на възможност за пушене на пациента преди процедурата.

По отношение на характеристиките, получени от изследването на данните, повишеното натоварване се характеризира с показатели от 800000 IU / ml, ниско - 400000 IU / ml. Наличието на вирус в тялото на пациента се индикира чрез PCR за хепатит не е отрицателен качествен тест.

Този вид изследване позволява да се определи колко опасен е пациентът към хората около него. Например, идентифицирането на високо ниво показва повишена инфекциозност на пациента. В допълнение, резултатите от анализа помагат да се формулира по-нататъшното най-ефективно лечение и да се определи до каква степен съществуващата терапия се счита за ефективна.

Бързият отрицателен отговор на тестовете показва успеха на избраната техника, а бавната показва необходимостта от корекции и използване на мулти-лечение.

Процесът на вземане на аналитичната процедура зависи от конкретния ден от хода на заболяването. Първото определяне се извършва на първия ден след като пациентът е приет в болницата, след което процедурата се повтаря на 4, 12 и 24 седмици след приема на лекарствата.

Така количественият анализ показва коя терапия е най-ефективна, продължителността на наличната терапия и опасността на пациента по отношение на други хора.

определяне на генотипа

При изследването на материалния анализ е важно да се определи точността на генотипа на вируса, който се осъществява. В момента има 11 разновидности на вируса на хепатит С, които от своя страна включват определени подвидове.

Всички тези видове реагират по различен начин на различни лечения, като отделните сортове са абсолютно устойчиви на много лекарства.

Генотипът позволява да се определи и покаже състоянието на черния дроб. Не е необичайно резултатите да се „не типизират” в резултатите, което означава, че вирусът в кръвта на пациента не се открива от тази тестова система. Това може да бъде открито, ако определен генотип не съвпада с тази зона. В такава ситуация анализът се взема многократно и се използва по-чувствителна система за изследване на материала.

Ултрачувствителен метод

Ултрачувствителният метод е необходим в някои случаи, когато диагностицирането на хепатит не може да се осъществи по други методи, като в същото време, кога да се премине към анализ се определя от лекуващия лекар:

• ако подозирате наличието на вирус на хепатит С при пациенти със скрито разнообразие на заболяването;
• наличието на антитела срещу вируса на хепатит С, непотвърдени чрез PCR диагностика;
• с цел да се определи качеството на ефективността на избрания метод на лечение и да се потвърди елиминирането на заболяването.

Чувствителността на този метод е много по-висока от обичайно използваната, но този метод не изключва получаването на фалшиви резултати, както положителни, така и отрицателни. В такава ситуация е важно да се контролира качеството на процедурата и възможността за замърсяване на самия материал.

Обяснение на PCR анализа

Декодирането на анализа се извършва на базата на представените материали, а резултатите от лабораторните изследвания включват определени данни, описани по-горе.

Транскриптът може да включва положителна PCR полимеразна верижна реакция и отрицателен ELISA в анализа, което означава, че пациентът няма признаци на хепатит С в кръвта, но в миналото е прехвърлил острата форма на заболяването. Като правило при диагностициране специалистите прибягват до използването на PCR тестове.

Обобщавайки всичко изложено по-горе, може да се заключи, че по време на анализа е важно да се спазват всички правила и препоръки, така че получените резултати да са възможно най-точни и на базата на получените данни е възможно да се определи ефективността на използваната терапия и по-нататъшната възможност за пълно възстановяване.

PCR анализ за хепатит С

За диагнозата "хроничен вирусен хепатит С (CVHS)" се изисква цялостно изследване на лицето, което включва клинични, лабораторни и инструментални изследвания. Важно от гледна точка на диагнозата за правилната диагноза е PCR методът - полимеразна верижна реакция.

Какво показва този анализ и защо е необходимо?

Този лабораторен метод открива РНК на вируса на хепатит С в човешката кръв. Заедно с ензимно-свързания имуносорбентен анализ (ELISA) за антитела към вируса, PCR се използва за поставяне на диагноза на CVHC и неговия патогенен генотип. Това изследване е един от най-новите методи за лабораторна диагностика. Неговата надеждност при CVHS надхвърля 97%, което се счита за много добър показател за научни изследвания.

Има три PCR кръвни теста за CVHS: качествено, количествено и генотипизиране на вируса. Първото проучване (качествен анализ) на вируса го открива в кръвта и затова се използва само за диагностика.

Второто (количествено) изследване определя степента на вирусно натоварване на организма, следователно се използва за наблюдение на ефективността на терапията.

Третият PCR (генотипизиране) изяснява диагнозата, установявайки генотипа на вируса, което е много важно за назначаването на правилно антивирусно лечение.

Същността на полимеразно-верижната реакционна техника е използването на ензими, които умножават генетичния материал на патогена в биоматериала. В процеса на такава репликация тръбата с кръв се нагрява няколко пъти и се охлажда до температурата, необходима за ускоряване на ензимната реакция. В резултат на тези манипулации, количеството на вирусния геном се увеличава многократно, което позволява да бъде открито дори с минимално количество.

PCR диагностиката има много предимства пред другите лабораторни тестове:

• висока чувствителност - 97-98%;
• гарантирана аналитична специфичност (разкрива точно патогена, който искате да намерите, а не неговия свързан щам);
• скорост на провеждане (отнема не повече от 2 дни, за да се получи заключение).

Три вида PCR анализи

Висококачествен PCR анализ се възлага на всички пациенти, при които ELISA анализът открива антитела към вируса на HVGS. След провеждане на висококачествена PCR могат да се получат две опции за отговор: "РНК се открива" или "РНК не се открива". За да се установи минималното количество вирус в кръвта, са необходими тестови системи с чувствителност най-малко 50 IU / ml. Ако концентрацията на вируса в кръвта на пациента е по-малка, отколкото диагностициумът може да определи, резултатът от проучването може да бъде фалшиво отрицателен. За да се избегне подобна диагностична грешка, лабораториите, извършващи PCR диагностика, трябва да бъдат снабдени с високо чувствителни тестови системи. В лабораторията "Invitro", например, се използват тестове с чувствителност от 15 IU / ml. Лабораторните работници са задължени да предоставят информация за чувствителността на тестовете на пациентите и лекарите при първото им искане.

Количественият анализ на PCR определя степента на виремия, т.е. концентрацията на патогена в кръвта, вирусния товар. Резултатът от това изследване, за разлика от висококачествената PCR, се изразява в числа, например 2 × 10 * 6 IU / ml, което означава 2 милиона международни единици в 1 ml кръв. Някои лаборатории използват друг индикатор - броя копия / ml. Тези два индикатора са лесни за преобразуване: 1 международна единица се равнява на 4 копия на РНК. Така, 2 х 10 х 6 IU / ml ще означава, че 8 х 10 х 6 копия на вирусна РНК в 1 ml, т.е. 8 милиона копия в 1 ml кръв.

Генотипирането е дефиницията на един от шестте генотипа на вирус. Клиничната картина, степента на развитие на усложненията на черния дроб и прогнозата за бъдещия живот на пациента зависят от генотипа на причинителя. Генотипът на вируса е много важен още на етапа на диагностициране, тъй като комбинацията от лекарства и продължителността на терапевтичния курс, които трябва да се поставят на пациента, зависят от неговото правилно определяне.

Но дори и това привидно „перфектно“ лабораторно изследване има своите недостатъци:

• проучването възпроизвежда генетичния материал на всички патогени, дори неживи, които могат да нарушат резултата. Следователно, за да се следи ефективността с помощта на PCR, повторният анализ се извършва не по-рано от 2 месеца след предходния, така че мъртвите вируси да могат да „напуснат” тялото на пациента;
• част от вирусния геном, която се определя чрез тестови системи, теоретично може да присъства в други вируси или микроорганизми, така че има възможност за фалшиво положителен отговор;
• вирусите мутират бързо. Понякога скоростта и степента на вирусна мутация са толкова високи, че тестовата система спира да улавя генома им. В резултат на това е възможен фалшиво отрицателен резултат.

За изравняване на тези недостатъци производителите на лабораторни тестови системи за PCR диагностика постоянно провеждат тестовете си, включително кръстосани реакции и чувствителност към определен генотип на вируса.

Как да направите PCR тест за хепатит С?

За да бъде заключението на PCR изследването надеждно, е необходимо стриктно да се спазват правилата за подготовка за него:

• изследването се провежда на празен стомах (глюкоза, мазнини, минерали, които влизат в кръвта от храната, могат да повлияят на скоростта и качеството на ензимната реакция);
• разликата между последното хранене и вземането на кръвни проби за анализ трябва да бъде най-малко 8 часа;
• в навечерието на изследването е забранено да се приема алкохол и да се консумират мазни храни, периодът на елиминиране на който е удължен;
• ден преди да отидете в лабораторията трябва да избягвате силен физически и емоционален стрес;
• до момента на вземане на кръвни проби не се препоръчва да се пуши.

За да се избегне появата на неверни заключения, предполагаемият пациент трябва да дойде в лабораторията малко по-рано от вземането на кръв. Отнема 15-20 минути, за да може човек да си поеме дъх, да се успокои. Адреналинът, който присъства в кръвта след бърза разходка, може да повлияе на резултата от изследването.

Ако пациентът, отнесен за анализ, приема някакви лекарства, той трябва да уведоми лекаря за това. Възможно е някои от тях да бъдат отказани за известно време (ако е възможно).

Резултатът от анализа на PCR за хепатит С

Декодиране на резултатите от лабораторния лекар на лабораторията, която е извършила анализа. Декодирането е определянето на отклонението на резултата от нормата. Скоростта на индикаторите се определя директно от производителя на тестовата система, която се използва от лабораторията за диагностика. Следователно, не е изненадващо, че в някои лаборатории вирусният товар се определя в IU / ml, а в други в копия / ml.

След като получи заключението, е необходимо да можем да го тълкуваме правилно. Лечението на резултатите от изследването трябва да се извърши от лекуващия лекар на пациента с хепатит С. Само след обективно, инструментално и лабораторно изследване на пациента, лекарят може да получи достатъчно количество данни за правилна интерпретация на получените PCR резултати.

Оценката на качествения анализ, като правило, не предизвиква затруднения дори при пациентите. Резултатът може да бъде само един: "detected" или "not detected". В този случай втората от тях е норма.

Показателите за количествен анализ са по-трудни за тълкуване. Той показва степента на вирусно натоварване на пациента. Дори сред хепатолозите няма консенсус за това как да се лекува откритата виремия. Повечето лекари са склонни да смятат, че трябва да се обмисли високо натоварване от повече от 8 × 10 * 5 IU / ml. Натоварване, по-голямо от 1 × 10 * 7 IU / ml, се счита за много високо, докато ниското натоварване е по-малко от 4 × 10 * 5 IU / ml.

Степента на вирусно натоварване показва вирулентност (агресивност) на вируса: колкото по-голямо е количеството му в кръвта, толкова по-бързо се развиват усложненията на черния дроб. Високата концентрация на вируса в кръвта на бременна жена увеличава вероятността от проникване през хематоплацентарната бариера към плода. Виремията също влияе върху ефективността на лечението: при ниски цифри ефективността на терапията е по-висока, отколкото при високите.

За да бъдем уверени в точността на анализа на PCR за хепатит С, е необходимо да се даде предимство само на онези лаборатории, които са добре доказани. Ценовата политика в този случай не трябва да играе основна роля.