ELISA за вирусен хепатит

9 март 2017, 16:25 Експертни статии: Нова Владиславовна Извочкова 0 3 608

За да се открие вирусен хепатит в организма, лекарството широко използва ензимен имуноанализ въз основа на откриването на концентрацията и вида антигени, използвайки антитела и ензими. Извършва се поетапно, чрез лабораторни изследвания, с висока точност на показанията. В зависимост от количеството и класа на антителата, цвета и концентрацията на ензима, който използва ELISA и съответно лекарят диагностицира заболяването, се променят.

Какво е ELISA?

Наличието на вирусен хепатит в тялото на пациента се определя с помощта на серологичен метод за анализ на кръвта за наличие на HCV вирус и маркери (тела и антитела), които го посочват. Имуноферментният тест (ELISA) изследва различни вируси, нискомолекулни съединения, макромолекули, техните качествени и количествени показатели, като използва проявлението на реакцията към техните антигени. За да направите това, използвайте ензима като етикет за регистрация на сигнала. Все по-често се използва в медицината, тъй като ELISA ясно открива добре дефинирани антигени, без да ги обърква с други, има висока чувствителност към наличието на инвазия при вирусен хепатит.

Недостатък на такава диагноза е невъзможността да се идентифицира причината за заболяването, тъй като методът само показва реакцията на имунната система на организма. Резултатите от анализа са засегнати от предишната ваксинация. За 8 часа преди анализа се препоръчва да се въздържат от ядене, никотин, алкохол. Основата на ELISA теста е ензимният и имунен отговор на вируса. Биологичните молекули се свързват с клетката и нейните елементи, микроорганизми, откриват вируса, след това работят ензими, които ви позволяват да изразявате имунния отговор във видим и измерим параметър.

Показания за анализ

Вирусният хепатит в организма може да причини рак и цироза на черния дроб. Значението на навременната диагноза е безспорно. Основният метод за диагностициране е ELISA тестът, който с висока точност определя наличието на вируса на HCV (IgM и IgG) и активността на неговите микроелементи. Задължителни тестове за преминаване на вирусен хепатит:

Хора с рискови групи (наркомани, хора със СПИН, служители на медицински и правоприлагащи институции).
Хора с остър или хроничен хепатит.
Бременни и планиращи бременност жени.

ELISA разпознава болестта на всеки етап. Резултатите от анализа, средно, са готови за 2 дни.

Критерии, определящи важността на анализа

ELISA тестът определя наличието на антитела от класа IgG, IgM, IgA. При диагностициране на вирусен хепатит лекарят не обръща внимание на техния тип, тъй като наличието на каквато и да е проява на вируса на HCV вече показва остър или хроничен стадий на заболяването. В ранните стадии на заболяването нивото на IgM се повишава (5 дни след заразяването); на 15 - 20-ия ден се появяват IgG антитела и могат да останат в човешката кръв дълго време дори след излекуване; IgA - се появява след 10-14 дни, намалява след лечението.

Ако IgG и IgA се открият след употреба на лекарства и тяхното ниво остава със същата скорост - носителят има хронична форма на хепатит. Важен критерий за теста ще бъде ясното определяне на наличния клас антитела и тяхното количество. Въз основа на това, можете да знаете не само за наличието на болестта, но и за етапа на неговото развитие. Откриването на такива елементи в кръвта на пациента позволява да се предпише правилното и навременно лечение, за да се предотвратят по-сериозни последствия.

Как се прави?

Разпределете пряк и не пряк ELISA тест. Етапи директни:

Събира се биологичен материал и се поставя в специални отвори.
В рамките на 15-30 минути антигени са прикрепени към повърхността на ямките.
Добавяне на антитела към ямките към антигена. Всички останали за 1-5 часа.
Отстранете неприкрепените антигени (изливайте съдържанието на ямките).
Изплакнете ямките със специален разтвор.
Добавете ензимен разтвор към ямките. Оставете за 30 минути - 1 час.
Използването на колориметрия (откриване на цвят и концентрация на цвета на съдържанието на кладенеца, сравнение с показатели, които са пряко пропорционални на концентрацията на вируса).

Използването за диагностициране на индиректна ELISA ще даде по-точен резултат.

Непряк метод ELISA се осъществява с използването на немаркирани антитела към откритите антигени и последващо добавяне на етикетирани към тях. Първо, кръвта се взема от пациента и се разпространява през гнездата за 15-30 минути. (антителата са фиксирани с дупки). След това в тях се въвеждат немаркирани антитела в продължение на 1-5 часа (образува се връзка на антитела с антигени - имунният комплекс). След това от ямките се изсипват незакачени микроелементи и се измиват със специален разтвор. На следващия етап лабораторният техник добавя етикетирани микроелементи в ямките за 15-30 минути. (това свързва немаркираните с маркираните с образуването на комплекса "антитяло-антитяло-антиген"). Екстра (в насипно състояние) се отстраняват отново по време на източване и промиване с разтвор. Следва ензимът, който променя цвета си за 5-30 минути. остава в дупките и цветовите данни се сравняват с данните от табличните показатели. Косвената ELISA е по-точна.

Какво показва ELISA за вирусен хепатит?

Имунологичният анализ позволява да се установи наличието на инфекция (вируси на хепатит от всякакъв вид, HIV, херпес, сифилис, цитомегаловирус, морбили, рубеола, вирус на паротит, вирус Epstein-Barr), е маркер на автоимунни заболявания, ракови клетки. Показва нарушения на репродуктивните функции (промени в тестостерона, пролактина, естрадиола и прогестерона), тиреоидна неизправност, хелминтна инвазия, хламидия. Ефективен за откриване на уреаплазмоза, магарешка кашлица, вирус Dange, вирус на Западен Нил, Borrelia. Списъкът с определения е висок, включва много елементи.

Потвърждаване на резултатите

Определянето на антигена на вируса на HCV чрез ELISA дава 98% точност. Използва се и за повторно тестване на биологичен материал с размити предишни индикатори. Наличието на IgM антигени не е показател за остър хепатит и изисква допълнителни изследвания. Когато ELISA тестът се повтори, резултатите съвпадат с 90-100%. При минимално несъответствие средната стойност се приема като индикатор. За максимална точност от гледна точка на лекарите съветват паралелно да се провежда биохимичен анализ на кръвта. За да тествате резултатите след ензимния имуноанализ, можете да използвате други диагностични методи.

Изследване на вирусен хепатит по метода на ife

ELISA за диагностициране на вирусен хепатит. Възможности за ензимен имуноанализ

Специфичната лабораторна диагностика на вирусния хепатит се основава на използването на имунохимични и молекулярно-биологични изследователски методи. Основните имунохимични методи са радиоизотоп или радиоимунен (RIA) и имуноанализ (ELISA). Имунохимичните диагностични методи се основават на специфичното взаимодействие на антиген - антитяло с последващо идентифициране на комплекса с помощта на специални етикети. Най-честият ензимен имуноанализ.

Първите доклади за използването на ензимен имуноанализ. като метод за определяне на всякакви вещества са публикувани през 1971 г. едновременно от две изследователски групи - B. Van Weemen, A. Schuurs и E. Engvall, P. Perlmann. Ензимният имуноанализ се основава на следния принцип: върху твърдата фаза, която използва главно повърхността на ямките на полистироловата таблетка, фиксира се антигенът на инфекциозния агент или антитялото (често смес от антитела) към антигените, които трябва да бъдат открити. Този антиген или антитела, които са фиксирани на твърдата фаза, се наричат имуносорбент.

В резултат на инкубирането на имуносорбента и тестовия серум в присъствието на откриваем агент, те се свързват с комплекса антиген - антитяло. След процедурата на измиване, по време на която се отстраняват несвързани антигени и антитела, се извършва инкубиране с конюгата. Като конюгат за откриване на HBsAg се използват анти-HBs, за откриване на антитела срещу вируса на хепатит С - антитела към човешки имуноглобулини (антивирусен конюгат), маркирани с пероксидаза от хрян. В резултат на това инкубиране се осъществява прикрепване към вече съществуващите антигенни комплекси - антитялото на допълнително въведения конюгат. След отстраняване на несвързания конюгат (промиване) субстратът се въвежда в ямките. Когато се използва конюгат на пероксидаза, водороден пероксид се използва като субстрат в комбинация с индикатор, който най-често се използва като ортофенилендиамин (OPD) или тетраметилбензидин (ТМВ). Резултатът се оценява фотометрично.

Качеството и надеждността на аналитичните възможности на ензимния имунологичен метод се характеризират с редица критерии, които включват чувствителност, специфичност, точност и възпроизводимост.

Чувствителността е минималното количество вещество, което може да бъде открито чрез ензимен имуноанализ. В този случай долната граница на чувствителността на този метод е концентрацията на изпитваното вещество в пробата, която съответства на най-малкия положителен резултат от определянето, който е статистически значимо различен от показателите на умишлено отрицателните проби. Чувствителността на IFTS зависи от редица обстоятелства, свързани както с дизайна на тестовата система (афинитет на имуносорбента, качеството на екстракционните и буферните системи), така и с разрешаването и точността на метода за регистрация.

Специфичност - способността да се идентифицират точно компонентите, за определянето на които е проектиран този ензимен имуноанализ. Специфичността на ELISA се определя до голяма степен от кръстосаната реакция на антитела или антигени (т.е. състава, използван като имуносорбент) с тясно свързани съединения, както и състава на инкубационната среда (матричен ефект).

Коректност - съответствието на средната стойност на резултатите от многократните определяния на една и съща контролна извадка с истинската стойност на измерения параметър. Точността на определянето в ELISA зависи от качеството на тестовата система и контролната проба. За добри тестови системи за имуноанализ, показателите за коректност са в диапазона 90-110%. Особеността на биомедицинските изследвания в ELISA е невъзможността да се установи точната стойност и затова като истинска стойност се приема средната стойност на няколко експертни лаборатории. Статистическият критерий за коректност е средната аритметична стойност и степента на нейното отклонение от истинската стойност, изразена като процент.

Възпроизводимост - способността на тестовата система да показва същите стойности при повторни изследвания на същата проба. Възпроизводимостта зависи както от случайни грешки (грешки) по време на процедурата на реакцията, така и от качеството на тестовите системи и от точността на метода за записване на резултатите. Счита се, че възпроизводимостта на същите контролни проби от една и съща фирма в различни лаборатории не трябва да надвишава стойността на коефициента на вариация от 15%.

Съществуват няколко специфични ELISA схеми за определяне на маркери за вирусен хепатит: а) директен ензимен имуноанализ; b) непряк ензимен имуноанализ; в) конкурентно инхибиране; в) метод „капан“ или „улавяне“.

По-често се използват молекулярно-биологични методи за диагностика на вирусен хепатит, полимеразна верижна реакция и хибридизация. Тези методи, особено PCR, позволяват да се открият много малки количества от специфична вирусна ДНК или РНК и по този начин да се прецени репликацията, а в някои случаи и репликационната активност.

Кръвен тест за хепатит С

Хепатит С е едно от най-често срещаните чернодробни заболявания, което се появява при заразяване с вируса на хепатит С (HCV), който влиза в организма преди всичко, когато влезе в контакт с кръвта на заразеното лице. Среща се хроничен и остър хепатит С. При 70-80% от пациентите с остър хепатит С няма симптоми на заболяването, само в някои случаи, след известно време след инфекцията, има прояви на заболяването, които се изразяват в умора, коремна болка, загуба на апетит, потъмняване урина, повръщане, гадене, изсветляване на изпражненията, жълтеница, болки в ставите. Като правило, симптомите се появяват 6-7 седмици след инфекцията, но продължителността на появата на признаци на заболяването варира от 2 седмици до 6 месеца. Ако се появят горепосочените симптоми, трябва да се консултирате с лекар по инфекциозни болести и да направите кръвен тест за хепатит С. Диагнозата на хепатита, извършена своевременно, може да открие болестта в ранните му стадии и значително да увеличи шансовете за възстановяване.

Когато е планиран тест за хепатит С

Ситуации, когато се изисква тест за хепатит С:

по време на бременност и семейно планиране;
пациенти със симптоми на хроничен или остър хепатит;
лицето е изложено на риск. Това са медицински работници, лица в затвора, служители на правоприлагащите органи, хора, които употребяват наркотици, имат голям брой сексуални партньори, имат СПИН, са на хемодиализа и други.

Подготовка за анализ на хепатит С

Не се изисква специална подготовка за анализ на хепатит С. За анализ се взема кръв от вена на празен стомах, като в същото време след последното хранене трябва да минат поне осем часа.

Анализи за хепатит С ELISA

Първият анализ, обикновено предписван за диагностициране на хепатит С - ELISA тест (ензимно-свързан имуносорбентен тест). Анализите за хепатит С ELISA позволяват да се открие наличието на антитела към вируса на хепатит С (анти-HCVAb) в кръвта. Ако резултатът от теста ELISA е положителен, то показва наличието на контакт на тялото с вируса на хепатит C. Но 40% от хората, които имат положителен ELISA, не откриват вируса в кръвта. Това явление се нарича фалшиво положителен резултат. Също така с помощта на ELISA се проверява донорската кръв.

RIBA за хепатит С

Анализът на RIBA за хепатит С се използва за потвърждаване на положителен резултат от ELISA. Методът на рекомбинантния имуноблотинг (RIBA) е по-точно проучване на наличието на антитела срещу вируса на хепатит С. Присъствието на вируса на хепатит С в организма също не определя положителен резултат, а само потвърждава наличието на антитела.

Тестове за хепатит С PCR

За да се открие наличието на вируси на хепатит С в кръвта (HCV RNA) и да се постави диагноза, те най-често използват анализа чрез метода на полимеразна верижна реакция (PCR). Това проучване дава възможност с висока точност да се открие наличието в кръвта на дори малко количество от вируса. PCR анализът за хепатит С може да разкрие наличието на вирус вече 5 дни след инфекцията, много преди появата на антитела. Когато резултатът от PCR анализа е положителен, това означава наличие на активна инфекция.

Съществуват такива вариации на PCR анализа:

количествена PCR, която позволява да се определи не само факта на наличието на вируса, но и вирусния товар (количеството на вируса). Този показател е от голямо значение за определяне на ефективността на лечението;
генотипиране, което установява генотипа на вируса на хепатит С, което е важно за определяне на продължителността и тактиката на лечение. Има повече от 10 генотипа на вируса на хепатит С, но за клинична практика е достатъчно да се определят пет от най-често срещаните видове: 1а, 1б, 2,3а / 3б.

Извършва се количествен PCR анализ:

с качествен положителен тест за наличие на РНК на вируса на хепатит С в серум;
за точна оценка на ефективността на лечението;
да се определи тактиката на лечение на пациента.

Няма пряка връзка между тежестта на хепатит С и количеството на вируса в кръвта. Концентрацията на вируса засяга инфекциозността на заболяването, т.е. колкото по-голямо е количеството на вируса в кръвта на пациента, толкова по-голям е рискът от предаване на вируса, например чрез сексуален контакт или от майка към дете. Също така ефективността на лечението зависи от концентрацията на вируса. По време на терапията благоприятен фактор е ниският вирусен товар, а много високият е неблагоприятен.

Направен е анализ на генотипа:

с качествен положителен тест за наличие на РНК на вируса на хепатит С в серум;
за точна оценка на ефективността на лечението;
да се определи тактиката на лечение на пациента;
да се предвиди хронизацията на инфекциозния процес;
за определяне на прогресията на заболяването.

Откриването на генотипа на вируса е от голямо значение за определяне на продължителността на лечението, което е важно, тъй като интерферонът има широк спектър от странични ефекти и ниска толерантност към пациента.

Декодиращ анализ за хепатит С

Обикновено отсъстват вирусни РНК, антитела към тях и антигени. Наличието на антитела в кръвта показва наличие на хроничен или остър хепатит С или период на възстановяване. Ако в кръвта присъства HCV РНК, която се определя чрез PCR анализ, това показва наличието на вирус в кръвта.

При неправилна техника на тестване, транспорт и аномалии в кръвта, PCR анализът може понякога да показва фалшиви положителни резултати. Анализите на ELISA и RIBA в ранните стадии на заболяването, когато тялото все още не е произвело достатъчно количество антитела, могат да покажат фалшиво отрицателен резултат.

Ако при дешифрирането на теста за хепатит С се получат положителни резултати, е необходимо да се свържете с лекар по инфекциозни болести и гастроентеролог за по-нататъшна диагностика и лечение.

Сегментираните неутрофили са намалени

Тромбоцитите на детето са нормални, повишени, понижени

Тиреостимулиращ хормон TGT

Диагностика на хепатит

Не може веднага да се определи наличието на хепатит в организма, тъй като инкубационният период на заболяването може да продължи до четири седмици. Когато се появят първите признаци на заболяването, в засегнатия организъм се появяват радикални промени в състава на кръвта: биохимичен анализ съобщава за сериозен здравен проблем и наличие на патогенен вирус. Въпреки това, за да се направи окончателна диагноза, не е достатъчно да се дари кръв за хепатит, както и подробна диагноза на хепатит.

Лабораторна диагностика на хепатит

Желателно е да се извърши след края на инкубационния период, за да може лекарят с най-голяма прецизност да определи наличието на чернодробно заболяване в организма. В противен случай предписаното лечение няма да даде желания терапевтичен ефект и дори да изостри преобладаващата клинична картина.

Диагностика на хепатит А

Обикновено диагнозата на хепатит А започва с подробен разпит на пациента и с назначаването на редица тестове, които трябва да се извършат възможно най-скоро. Това е:

биохимичен кръвен тест;
пълна кръвна картина;
PCR метод;
ELISA;
коагулация.

Ако болестта на Botkin прогресира, тогава се наблюдава анормален скок на билирубин, AlAT и AsAT, тимолова проба съгласно резултатите от биохимичния анализ на кръвта. Освен това се получават специфични анти-HAV IgM, които са неоспорим факт за наличието на хепатит А. t
Като цяло, анализът на кръвта се определя от спада на левкоцитите, скока в ESR и лимфоцитозата. И все пак, най-надеждният метод е PCR, който определя индикатора за РНК на патогенния вирус.
Освен това лекарят проучва симптомите на заболяването, след което може да направи окончателна диагноза и да премине към най-ефективната терапия. Необходимостта от инструментално изследване е изключително рядка. След успешно консервативно лечение в условията на хоспитализация и карантина на пациента се очаква окончателно възстановяване, а хепатит А не се повтаря отново.

Диагностика на хепатит В

За да се определи наличието на вируса на хепатит В, е възможно също така и резултатите от лабораторните изследвания, като за това е необходимо първото нещо, за да се дари кръв за хепатит. По природа патогенният вирус има три основни антигена - HBsAg, HBcAg и HBeAg, към които се произвеждат антитела в тялото. Главната характеристика на тази клинична картина е ELISA - ELISA, който просто показва специфични маркери на хепатит B.
Веднага трябва да се изясни, че антигенът HBsAg се появява в кръвта още преди първите симптоми на хепатит и е надеждно определен в иктеричния период. Обаче, отрицателен тест не изключва наличието на хепатит В и поради това изисква използването на също толкова ефективен метод на полимеразна верижна реакция (PCR).
Ако подозирате, че хепатит В е задължителен, се провежда биохимичен кръвен тест, който се препоръчва да се премине на първо място. Провеждането на биопсия на черния дроб и ултразвуковото изследване на перитонеалните органи се обсъжда индивидуално, но когато историята на заболяването е много ясна, няма нужда от клинични методи за изследване.

Чернодробна ехограма при автоимунен хепатит в стадия на хроничен хепатит

Диагностика на хепатит С

За да направите тази диагноза, не е достатъчно да дарите кръв за хепатит, тъй като вирусът може да преобладава в тялото в латентна форма. И все пак, основните лабораторни тестове са всички анализи, представени по-горе, както и допълнителното изпълнение на чернодробна биопсия. Това микроскопско изследване на биологичен материал (в нашия случай парче тъкан на черния дроб) определя степента на патологичния процес и тъканната фиброза. Вземането на проби от материали се извършва под местна упойка, усложненията от такава процедура са изключително редки в медицинската практика.
Ако се подозира хепатит С, основният метод за клиничен преглед е ултразвук на перитонеалните органи. Причината е проста: болестта често се проявява чрез визуална промяна в засегнатия черен дроб, промени в нейната структура и размер. По този начин можете да определите:

размера на черния дроб, далака, панкреаса и жлъчния мехур;
патологични промени в тези органи;
общ кръвен поток в перитонеалните органи;
оптимална площ за извършване на чернодробна биопсия.

Този метод на клиничен преглед определя всички фокални патологии на органа на микроскопично ниво. Ако черният дроб е представен на екрана в сива скала, се изисква незабавна биопсия, тъй като сивият цвят визуализира засегнатите тъкани на „човешкия филтър“.

Превенция на хепатита

Тъй като болестта не се проявява незабавно, тя е далеч от всички клинични картини, които преминават към незабавно лечение. Пациентът може просто да не е наясно с наличието на патогенен вирус в организма, който от своя страна бързо се разпространява в кръвния поток и инфектира здрави чернодробни клетки.
За да се избегне такава трагична съдба, се препоръчва да се спазват всички превантивни мерки. Такава бдителност значително ще намали риска от заболеваемост и ще ви спаси от сериозни здравословни проблеми в бъдеще. Основните правила за превенция са представени по-долу:

измийте ръцете си след улицата;
да подлежи на висококачествена преработка на пресни зеленчуци и плодове;
да извършват всички превантивни ваксинации, посочени в годишния календарен план;
селективно отношение към сексуалните партньори;
избягвайте контакт с болни хора;
използвайте само спринцовки за еднократна употреба и бъдете особено бдителни на станции за кръвопреливане.

Препоръчително е също така редовно (веднъж на всеки шест месеца) дарявате кръв за хепатит, за да се уверите, че вирусът не прониква в организма и не заразява здравите чернодробни клетки. Ако се установи диагнозата, е необходимо незабавно да се превърне в диспансеризирана сметка и да се следват всички препоръки на специалист.

Автор на публикацията:
Сиропятов Сергей Николаевич
Образование: Ростовски държавен медицински университет (Ростовски държавен медицински университет), катедра по гастроентерология и ендоскопия.
гастроентеролог
Доктор по медицински науки

ELISA метод за откриване на хепатит

Съвременната медицина е известна с много заболявания на черния дроб. HCV (вирусен хепатит С) е сред най-често срещаните и опасни, тъй като тази инфекция често се развива безсимптомно и води до критични усложнения, дори смърт. Ето защо навременното диагностициране на заболяването, което се извършва с помощта на различни методи, включително ензимно свързан имуносорбентен анализ (ELISA) за откриване на антитела към вируса в кръвта, е от първостепенно значение.

Заявление за HCV инфекция за диагностициране на хепатит

При лабораторна диагностика за откриване на хепатит С (HCV инфекция) се използват два вида методи:

Серологичен, базиран на откриването на антитела срещу вируса на хепатит С (анти-HCV), наричан също ELISA (ензимно-свързан имуносорбентен анализ). Целта е да се открият анти-HCV (IgM и IgG маркери), използвани за скрининг и за диагностициране на хепатит С. И двата маркера могат да бъдат открити в кръвта (плазмата) в различни комбинации, което изисква подходяща клинична интерпретация. За да се потвърди наличието на анти-HCV, се провежда RIBA (рекомбинантен имуноблот) тест.
Молекулярно биологично, насочено към откриване на РНК вирус. Тестът за НСV РНК се предписва за следните категории пациенти:
- с идентифицирани анти-HCV;
- без установен анти-HCV, но с установени епидемиологични и клинични данни, изискващи изключването на острата форма на HCV.

РНК на вируса може да бъде открита в кръвта още 14 дни след инфекцията, т.е. преди появата на анти-HCV, която се проявява през първите 2-3 месеца.

За окончателно потвърждение на диагнозата (особено когато е открит само един от двата маркера на HCV инфекция), експертите препоръчват след определено време да се провеждат повторни тестове на анти-HCV и HCV РНК.

Откриване на хепатит чрез ELISA

За осъществяване на ранна диагностика на вирусен хепатит, особено асимптоматични, аникерни форми, в серума, се открива наличието на вирусни протеини (антигени) или антитела към тях (произведени от имунната система при влизане на вирусите в организма) чрез ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA). Това е универсален метод за имунологична диагностика, неговата същност е в изследването на взаимодействието на "антиген-антитяло". Широко се използва в много страни по света.

Определянето на хепатит чрез ELISA позволява не само да се установи точна диагноза, но и да се оцени естеството на заболяването, както и да се избере компетентно и ефективно лечение с използване на традиционни лекарства (интерферон, рибавирин), лекарства с пряко действие (Sofosbuvir, Daclatasvir) и техните генерични продукти от индийско и китайско производство.

Когато е възможно, диагнозата вирусен хепатит чрез ELISA се допълва от PCR (полимеразна верижна реакция), която позволява да се определи наличието на хепатитни вируси в РНК.

Колко точен е ензимният имуноанализ

Според експертни оценки, точността на метода ELISA е 95%, т.е. при 95 от 100 пациенти, използващи ензимен имуноанализ, наличието и количеството на HCV антитела - IgM и IgG могат да бъдат открити в кръвта. Ако резултатът е положителен, възможно е да се диагностицира контакт с НСV с тялото (не самия вирус, а именно наличието на антитела в кръвта към него, което може да е резултат от вече пренесена болест).

Все пак, въпреки високата чувствителност на ензим-свързания имуносорбентен анализ (ELISA), при 40% от пациентите с положителен резултат, вирусът може да не бъде открит, което показва съмнителен или фалшиво-положителен резултат.

За да се потвърди точността на резултатите от ELISA, RIBA (рекомбинантен имуноблотинг) метод се използва за по-точно проучване на откриването на антитела срещу HCV.

Тест за анти-NCV ядро

Ефективните проучвания за определяне на наличието на антитела към вирусите на хепатит включват анти-HCV ядро, което се използва като потвърдителен тест, когато се получават "несигурни" резултати.

Ако в серума се открие анти-HCV ядро при разреждане 1: 1000, вероятно ще се диагностицира положителен резултат, т.е. болестта присъства.

Ако пробите в разреждане 1: 1000 са отрицателни, при разреждане 1: 200 са положителни, изследването е необходимо за наличието на вирусна РНК. В този случай най-вероятно няма HCV инфекция.

Важно е да се разбере, че при хронични форми на HCV антителата постоянно се откриват и по време на елиминирането (отстраняването от клетките на тялото) на вируса, те продължават в продължение на 4-8 години или повече. Следователно, наличието на анти-HCV не винаги показва инфекция на тялото и не позволява да се правят обективни заключения за активността на процеса.За да се получат точни данни за вирусното натоварване, степента на увреждане на черния дроб, продължителността на инфекцията и разликата между остри и хронични форми на заболяването, се препоръчва да се използва определението на спектъра на антитела към различни HCV пептиди. Важно е също да се наблюдава тяхната количествена и качествена динамика.

ELISA анализ - от скрининг за HbsAg до комплексна диагностика

С въвеждането на съвременни технологии в медицината нарастват възможностите на имунохимичните диагностични методи, които са способни бързо и точно да разпознаят болестта, когато другите методи са безсилни. Разбирането, че вирусът на хепатит В може да бъде в организма в много ниска концентрация, при което не може да бъде открит дори чрез такъв надежден метод като PCR, прави необходимо да се преразгледа проблемът за диагностицирането на това заболяване и да се оценят възможностите на имуноанализ.

В този материал ще анализираме подробно всичко, свързано с този вид лабораторни изследвания. Ще научите какво е ензимен имуноанализ и как се извършва, какъв е австралийският антиген и как се определя, какви са неразбираемите абревиатури Hbs ag, Hbcor, тяхната роля в дешифрирането на анализа, както и много полезна и интересна информация.

Съдържание на статията:

Обща информация за ELISA

ELISA (съкратено ELISA) е лабораторен диагностичен метод, който може да открива както антигени, така и антитела от голямо разнообразие от инфекции, включително хепатит B. Текущите познания за свойствата на вируса и характеристиките на имунния отговор на организма позволяват не само да се открие инфекцията, но и да се идентифицира етап, ефективност на ваксинацията и оценка на ефективността на лечението.

Същността на ензимния имуноанализ

ELISA се основава на реакцията "антиген-антитяло", или по-скоро на нейните свойства.

В отговор на нахлуването на чуждо вещество (антиген), което по-специално е протеин на вируса, тялото произвежда защитни протеини - антитела. Антителата влизат в комплексна реакция с антигена, блокирайки неговата активност.

Ще говорим повече за антигените и антителата по-долу, но сега ще отбележим, че за всеки антиген има строго индивидуални, или според лекарите, хомоложни антитела. Така, ако искаме да открием специфичен антиген в кръвта, ще използваме диагностична таблетка с антитела към нея. Ако в кръвта има антиген, той ще реагира с антитела, които могат да бъдат открити по различни начини. И обратно. Ако искаме да намерим някакви антитела, тогава е необходима таблетка с подходящ антиген.

Най-често, диагностичната стойност на мечката само на антителата, с които можете да диагностицирате почти всяка инфекция. Въпреки това, особеността на вируса на хепатит В е, че основната роля в диагнозата се играе от един от антигените - австралийския антиген.

Как е IFA

Помислете за типична ELISA процедура за конкретен пример, когато искате да идентифицирате антитела към патогена.

За диагностика се използва таблетка с 96 гнезда, които са предварително наситени със съответния антиген. Освен това процедурата е както следва:

серумът се прилага към всички клетки;

хомоложни антитела реагират с антигена и се прикрепят към плаката;

измити таблетки, отстраняване на неприкрепени антитела;

след това в клетките се въвежда ензимен етикет - вещество, което реагира с антитела и причинява оцветяване на съдържанието на клетката.

Това е стандартната ELISA процедура с оцветяване, която се използва, например, в имунохроматографски тест ленти.

ELISA не се ограничава до качественото определяне на антитела или антигени на патогена. Колкото повече антитела се съдържат в клетките на таблетката, толкова по-силен е оцветеният разтвор. Сравнявайки оптичната си плътност с контрола, съвременното оборудване може точно да изчисли концентрацията на антитела на единица обем. По този начин се извършва количествен ELISA, като мярката за измерване, при която най-често са единиците на оптичната плътност (EOP).

Имунохимилуминисцентно изследване

Днес има няколко десетки вида ELISA, всеки от които има предпочитан обхват. Най-популярен при диагностицирането на хепатит В е имунохемилуминисцентният анализ.

Ензимният етикет за този анализ не е хроматин, както при стандартния ELISA, а специални вещества - фосфори, които карат комплекса да свети в ултравиолетова светлина.

С помощта на специално устройство - луминометър, можете точно да определите нивото на емисиите и, като следствие, концентрацията на желаното вещество.

Чрез методите ELISA се определят почти всички съществуващи антигени на вируса на хепатит В и антителата към тях.

Антигени на вируса на хепатит В: Hbs, Hbe и Hbc

Терминът антиген (антиген) идва от две английски думи: антитяло - антитяло и генератор - производител. По този начин, под антигена разбира всяко вещество, което причинява образуването на антитела в тялото към него. Най-честите антигени са протеинови съединения.

Днес са известни три антигена на вируса на хепатит В: hbsag, hbc и hbe.

Австралийски антиген

Протеинът, който е част от външната обвивка на патогенния хепатит В, се открива много преди откриването на самия вирус. Този антиген е получил името си, защото за пръв път е бил идентифициран от местните жители на Австралия. Първоначално протеинът не се счита за антиген, а е съвсем обичаен елемент от кръвта сред местните жители, а осъзнаването на връзката му с чернодробните заболявания идва малко по-късно.

Дългосрочното запазване на антигена в кръвта и отсъствието на антитела показва възможността за образуване на HBeAg-позитивен хроничен хепатит В t

Днес в професионалната литература наименованието „австралийски антиген” на практика не е намерено и е заменено от международното съкращение - HbsAg (повърхностен антиген на хепатит b - повърхностен антиген на хепатит В). В допълнение, можете да намерите съкращения hbs антиген или просто hbs. Всяко от тези съкращения е приемливо и може да бъде допълнено чрез записване на HBV или HBV - вируса на хепатит В (вирус на хепатит В).

Повърхностният антиген на вируса на хепатит В има една забележителна характеристика, която го прави незаменим диагностичен маркер - концентрацията му в кръвта може да достигне много високи нива, до половин милиграм на милилитър кръв. Това е така, защото само малка част от новите HBsAg, които се образуват по време на размножаването на вируса на хепатит B, отиват в изграждането на мембраните на нови вирусни частици, а останалите - свободно циркулират в кръвта. В резултат на това броят на частиците hbs в кръвта може да надвиши броя на вирионите стотици хиляди пъти.

Тази характеристика прави австралийския антиген основен маркер при скрининг диагнозата на хепатит В, който се открива в кръвта още 4-6 седмици след инфекцията. Когато се образуват антитела, повърхностният антиген постепенно се замества от тях. Ако след 6 месеца HBsAg продължава, това показва прехода на инфекцията към хроничната форма.

Наскоро, когато стана възможно да се определи концентрацията на hbs hbv, неговата роля в диагностиката се увеличи още повече, тъй като разчитането на нивото на антигена може да разграничи хроничния хепатит B (HBV) от здравословно състояние на носителя, както и да наблюдава ефективността на лечението.

Антигени на ядрото

В ядрото на вируса - нуклеокапсид - са протеини, които контролират репродукцията на вируса HBcoreAg и HBeAg.

HBcoreAg, който също може да се нарече HBCore-антиген, hbc или ядрен антиген, може да бъде намерен само в тъканите на черния дроб, директно в ядрата на хепатоцитите. Този антиген не се открива в кръвта и няма диагностична стойност.

Структурата на вируса на хепатит

HBeAg (HBe, HBprecoreAg) - напротив, играе важна роля в диагнозата. HBeAg и HBcoreAg са близки роднини. Те имат голямо сходство на структурата и се различават главно в пространственото положение на молекулите. За разлика от HBcore, HBe не е част от нуклеокапсидната стена и циркулира свободно в кръвта.

Ролята на HBe в инфекциозния процес не е достатъчно ясна, но особеностите на неговото поведение и връзката им с хода на инфекциозния процес вече са достатъчно проучени. HBeAg показва активното размножаване на вируса и ви позволява да определите надеждно фазата на хроничен CHB - HBeAg-позитивен или HBeAg-отрицателен.

HBe може да се открие в кръвта още в инкубационния период на острия вирус на хепатит В (HBV), докато висока концентрация на HBeAg за 3 седмици най-вероятно показва заплаха от хроничен процес. Концентрацията на HBe е пряко свързана със съдържанието на Dane частици (т.нар. Вирусни частици на хепатит B) - колкото по-високо е количеството на HBe, толкова по-висока е концентрацията на HBV ДНК в кръвта.

HBeAg е основен маркер на инфекциозност на заболяването. Кръвта на HBeAg-позитивни пациенти е много по-заразна от HBeAg-негативната. Например, при бременни жени, положителни за HBe и Hbs, вероятността за предаване на инфекция на детето достига 50%, докато вероятността за такова събитие при HBe-отрицателни, но Hbs на положителни майки е 10-30%.

Hbe определя хода на хроничния хепатит. HBeAg-позитивният хроничен хепатит В има много по-неблагоприятна прогноза по отношение на развитието на цироза.

Това е може би всичко, което трябва да знаете за HBV антигените, и ще преминем към втората група маркери на хепатит B - антитела.

Какво означава положителен или отрицателен резултат от ОВОС за хепатит С?

За да се определи точно вида хепатит след предварителна диагноза, да се предвиди хода на заболяването, да се установи етапа на неговото развитие, се използват различни серологични изследвания. Най-точните данни се получават след ензимния имуноанализ. С помощта на ELISA хепатит С, диагностициран в 95% от случаите. Именно този анализ дава възможност да се открият антитела на антивируса на хепатит С (HCV антивирус) и да се оцени не само степента на активност на патологичния процес, но и степента на ефективност на антивирусната терапия, предписана от лекуващия лекар и провеждана под негов контрол.

Когато е необходимо изследване и неговите характеристики

Хепатит С е най-опасният вид на това заболяване, тъй като има дълъг латентен (латентен) период и опасни последствия. За да се избегне появата и развитието на правилна и навременна диагноза позволява, един от най-информативните методи, от които се признава имуноанализ.

Възможно е да се потвърди наличието на HCV инфекция в кръвта на пациента с помощта на серологични маркери, а анализ, който се основава на комплекс от структурни и неструктурни вирусни пептиди, позволява получаването на най-пълните и надеждни данни за съществуването на антитела. При здрави хора антителата срещу вируса на хепатит С липсват в кръвта на пациента и тяхното откриване показва наличието на патоген и развитието на патологичен процес.

В хода на проучването специалистите идентифицират IgM и IgG общите антитела, които имат пряко отношение към структурните и неструктурните протеини на HCV. Провеждането на това изследване ни позволява да идентифицираме пациенти, заразени с вируса на хепатит С в ранен стадий на заболяването.Присъствието на тотални антитела в кръвта на пациента показва началото на заболяването или предишната инфекция.

Началото на заболяването се индикира от наличието на антитела от клас IgM, а хепатит от тип С може да се прецени по откритите антитела от IgG клас. Те стават потвърждение за възстановяване (крайният етап на заболяването), като за този период е характерно анатомично и функционално възстановяване на засегнатите органи.

Навременното провеждане на ELISA (ELISA) ви позволява да идентифицирате патологичния процес на ранен етап на развитие, да диагностицирате болестта с висока точност и да увеличите шансовете за бързо възстановяване. Тестът ELISA дава възможност да се определи не само наличието на вируса, но и броя на специфичните общо антивирусни антитела.

Жени в състояние на бременност при регистрация в женската клиника.
Пациенти, които имат симптоми на остър или хроничен хепатит.
Медицински специалисти, които са в постоянен контакт с биологични материали.
Пациенти с диагноза СПИН.
Граждани, пристрастени към наркотици.
Пациентите с алкохолизъм и тези, които водят асоциален начин на живот.

Насочване към теста ELISA (ензимен имуноанализ) и приемане на служители на правоприлагащите органи или служители на обществени служби. Необходимостта от ELISA се появява, ако подозирате нарушение на функционалността на черния дроб или при получаване на съмнителни данни за състоянието на органа след ултразвук. Лекарят може да даде на пациента насочване за кръвен тест ELISA, ако последният трябва да претърпи сложна хирургична интервенция. Ако жена (особено над 30 години) планира бременност, а повишените стойности на билирубин или трансфераза (ALT, AST) се откриват в кръвния тест.

Специфични антивирусни IgG антитела са открити в продължение на няколко години. Тяхната концентрация постепенно намалява, което потвърждава положителната динамика. Що се отнася до хроничния хепатит С, в този случай броят на общите анти-HCV антитела не се променя. Точната диагноза се основава на определяне на нивото на IgM антитела.

Курсът на хепатит C зависи от генотипа на вируса, който е причинил развитието на болестта. Известни са 11 съвременни разновидности на медицината. В най-трудните ситуации е възможна инфекция с няколко генотипа на вируса, като един от тях винаги се оказва доминиращ. Само точната диагноза ще помогне да се изберат най-ефективните лекарства за ефективна терапия, да се избере дозата им и да се определи продължителността на терапевтичните интервенции.

Оценка на резултатите от изследванията

За да се постави диагноза подозрителен хепатит С и да се получи индикативна информация за количеството и качеството на патогена, се провежда ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA), при който специалистите получават потвърждение за наличието на вируса в организма и могат да преценят неговата активност.

С това изследване можем да направим заключения за:

вирусен товар;
рискът от развитие на хроничен процес;
активността на репродукцията (репликация) на молекулата на HCV РНК;
продължителността на патологичния процес;
степента на увреждане на черния дроб.

Оценява се и степента на риск от хронично заболяване. Идентифицирани с помощта на ELISA антивирусни HCV антитела показват вирусна репликация. Крайните резултати изискват потвърждение с по-точни изследвания.

Качествената оценка на резултата от ензимния имуноанализ се изразява като положителен или отрицателен резултат. ELISA позволява да се открие хепатит С в ранен стадий на развитие на заболяването, както и по време на протичането на заболяването в ненормална форма.

Анализът има някои предимства, включително:

Точност на качествените и количествените показатели.
Минималното време за проучване.
Поетапно изпитване.

Ензимният имуноанализ е едно от изследванията, които се отличават с висока точност, но въпреки всички предимства, в някои случаи не позволяват да се идентифицира патогенът, присъстващ в човешкото тяло.

За изследвания, лабораторният асистент взима венозната кръв на пациента и я поставя в специални контейнери. След известно време антигените (чужди микроорганизми) се прикрепят към стените на съда. Специалистът вмъква имуноглобулини (антитела) в съда и търси имунен отговор.

Получените резултати се сравняват с данните от специално съставена таблица. Резултатът се оценява като:

Положителен, показващ наличието на остра форма на заболяването, ако присъствието на антитела от класовете IgA, IgG, IgM се определя по време на кръвния тест.

Отрицателен - не са открити и трите вида антитела, липсват.

Фалшиво положителен - ELISA резултатът е положителен, но не е потвърден след PCR (полимеразна верижна реакция).

Съмнителни - маркери в кръвта не се откриват при наличие на хепатит С. Това е възможно с твърде ранна диагноза. Необходим е повторен анализ след 2-3 седмици. За точна диагноза направете PCR анализ.

Възможен е фалшиво-отрицателен резултат от анализа при пациенти, приемащи лекарства, които имат инхибиторен ефект върху защитната система на организма.

И двете фалшиво положителни и фалшиво отрицателни резултати от анализа са възможни по няколко причини. На първо място, това е минималното вирусно натоварване в най-ранния етап от развитието на заболяването. Също толкова важно е състоянието на имунната система на пациента и индивидуалните му характеристики. Резултатите от проучването влияят значително на приложението на лекарства от имуносупресорите.

Невъзможно е да сте напълно уверени в точността на резултата от ензимния имуноанализ, ако пациентът е жена в състояние на бременност. Фалшиви резултати са възможни в случаите, когато анализът се извършва за пациенти, страдащи от автоимунни заболявания, онкологични заболявания с доброкачествени тумори.

Допълнителни изследвания се провеждат, ако пациентът наскоро е претърпял сериозна инфекциозна болест, той е бил диагностициран с метаболитно нарушение или неизправност на ендокринната система. Ако съставът на кръвта повиши нивата на хепарин или значително намалени нива на микроелементи.

Точността на анализа може да бъде увеличена чрез спазване на съществуващите правила за подготовка за нейното доставяне:

Кръвта се дарява само на празен стомах. Последното хранене се разрешава най-малко 8-10 часа преди събирането на материала.
Вечерта, преди анализа, е необходимо да откажете да ядете мазни, пържени, пикантни, пушени продукти и ястия.
Не може да се говори за пиене на алкохол.
По-добре е да се откажат от пушенето ден преди кръводаряване.

Имуноферментният анализ може да се направи само за пациенти, които в момента не страдат от катарални, възпалителни или инфекциозни заболявания и не се оплакват от неразположение.

Нарушаването на изброените правила и изисквания води до това, че резултатът от анализа се оценява като фалшиво положителен. Тази ситуация се развива в 15-20% от случаите. Въпреки това, за пълно доверие, лекарите насочват пациентите за допълнително изследване, по време на което трябва да дарят кръв за PCR.

Полимеразна верижна реакция

Диагнозата не е възможна само въз основа на резултатите от ELISA анализа. Наличието на антитела не е доказателство за наличие на патогенен вирус в организма по време на проучването. Погрешното тестване може да предизвика нервен срив или дори по-остра реакция на пациента. Диагнозата въз основа на резултатите от ELISA не е точна. Необходими са допълнителни изследвания, резултатите от които ще дадат окончателната присъда на лекарите.

Важно е да се помни, че фалшиво положителен резултат от теста е възможен при хора, които понастоящем страдат от други инфекциозни заболявания, но имунната им система не реагира правилно на проникването на патогени или вируси в тялото.

Диагностициране на хепатит С позволява провеждането на редица лабораторни изследвания, като специално място сред тях е ензимно-свързаният имуносорбентен анализ (ELISA). Качествената оценка на показателите се определя като положителен или отрицателен резултат. Отсъствието на вируса на хепатит В в кръвта на пациента е норма, но в някои случаи, след проучването, експертите заявяват, че в биологичния материал са открити незначителни концентрации на някои РНК фрагменти (рибонуклеинова киселина). Идентифицирайте ги с помощта на PCR (полимеразна верижна реакция).

Този кръвен тест прави възможно идентифицирането на причинителя на хепатит С на ранен етап от развитието на заболяването и да се направи диагноза с висока точност. Проучването се основава на факта, че вирусите имат ДНК молекули (хепатит В) или РНК (хепатит С) в тяхната структура.

По време на анализа на PCR, използвайки специално лечение на кръвни проби на пациенти:

увеличаване на концентрацията на молекули на нуклеинова киселина;
определят вида им;
установи вида на патогена.

Ако в човешката кръв има малко количество фрагменти на патогенна РНК, всички те ще бъдат открити чрез PCR. Това дава възможност да се направи точна диагноза. Основната разлика на този анализ от всички други изследователски методи е 100% точна диагноза.

Този анализ се извършва в изследването на кръвта на бременни жени, които са се обърнали към антенатална клиника за регистрация, със съмнение за хепатит С с дълъг латентен (латентен) период, с трудности при поставянето на точна диагноза с помощта на ELISA. PCR е необходима в случаите, когато е получен съмнителен резултат след ензимен имуноанализ.

Хепатит С вирус в тази ситуация е в тялото на пациента, но все още не е предизвикал бързото развитие на болестта. Това е латентният ход на болестта. Анализът се извършва доста бързо, тъй като не е необходимо да се отглежда патогенът с помощта на хранителна среда, за да се получи резултатът. Основната разлика между PCR и ензим-свързания имуносорбентен анализ (ELISA) е, че в това проучване няма такова нещо като фалшиво-положителен или съмнителен резултат.