Хепатит С е възпаление на чернодробните клетки, което възниква в резултат на инфекция с вируса на HCV (хепатит С) чрез контакт с кръвта на инфектиран човек. Генетичният код на флавивирус HCV се носи от молекула РНК (рибонуклена киселина), съдържаща се в структурата на вируса. Този животозастрашаващ феномен се отличава със секретност в началния етап на патологията. Интервалът от време между инфекцията и началото на симптомите (реакцията на имунната система) може да бъде от един месец до шест месеца. По правило болестта е хронична и е трудно да се излекува.
Съвременната медицина ви позволява да диагностицирате патология с леко увреждане на черния дроб. Най-честите и ефективни диагностични методи включват PCR анализ. Обмислете в тази статия какво е то и какви видове съществуват.
Какво е изследването
PCR анализ за хепатит С е лабораторно изследване, което открива флуирус, генетичния материал на рибонуклененова киселина (РНК). Той определя броя на молекулите на РНК в кръвта, качеството на биологичния материал, генетичния тип HCV flavirus.
PCR методът за хепатит С прави възможно откриването на минималното количество флавирус преди образуването на антитела, като правило, скоро след заразяването.
Изследването често се споменава като РНК анализ, тъй като открива частици рибонуклеинова киселина с размер от 30-60 nm, съдържащи се в флававируса.
Изследването се провежда по следния начин: на празен стомах пациентът дава кръв от вена, която след това се тества с различни методи:
- PCR в реално време се извършва по затворен автоматизиран начин и има долна граница за откриване на РНК вирус, равна на 15 IU / ml;
- COBAS AMPLICOR с чувствителност от 50-100 IU / ml.
Колкото по-висок е прагът на чувствителност на диагностичната техника, толкова по-големи са шансовете за намиране на най-ниското съдържание на вируса в изследвания биологичен материал.
Какви видове анализ се използва
Анализът, който се използва успешно от няколко десетилетия, се нарича PCR хепатит и може да бъде открит много лесно и бързо. В медицината има два метода на реакцията, които се различават фундаментално:
- качествен метод разкрива наличието в биологичния материал на генетичния източник на специфичен вирус;
- количественият анализ измерва броя на генетичните вещества, което позволява да се определи етапа на патологията или да се оцени ефективността на терапевтичния курс;
- генотипирането определя вида на вируса, присъстващ в организма.
Като цяло, кръвен тест помага да се идентифицира естеството на виремията и генетичния тип на патогена. Като правило, изследванията се извършват 1 път в зависимост от степента на чувствителност на диагностичната система. Ако е необходимо, повторното изпитване се извършва с помощта на ултрачувствителен реагент.
PCR с високо качество
Какво е висококачествена PCR РНК за хепатит С? Същността на реакцията е в присъствието на последователността на хепатит RNA и реакцията е възможна само в присъствието на вирусни протеини с подобна етимология в ELISA. В процеса на сравнение се откриват натоварването и възможните увреждания на чернодробната област.
Отличителна черта на този метод е способността да се открие дори наличието на отделен ген.
Трябва да се отбележи, че след получаване на резултатите от PCR и ELISA тестовете, пациентът се нуждае от подходящо лечение, независимо от крайния резултат от имунологичния анализ. Положителният индикатор показва инфекция, а PCR негативът показва намален брой вирусни частици спрямо нивото на чувствителност.
Съществуват няколко условия, които влияят върху производството на отрицателен PCR и ELISA:
- липса на подходящи условия за събиране на материали;
- полученият анализ съдържа замърсяване;
- в случай на ранно инжектиране на хепарин на пациента.
Пациентът не трябва да спазва определени правила за вземане на кръвни проби за PCR анализ, в този случай качеството на този анализ зависи от медицинския специалист, който извършва процедурата. Способността да се установи наличието на заболяването (особено в острата форма) се появява в рамките на няколко седмици след инфектирането.
Количествен анализ
Препоръчва се количествен тест за откриване на вирусното натоварване непосредствено преди образуването на допълнителна терапия и реакцията на организма. Процесът на вземане на кръвни проби се извършва по подобен начин, както при висококачествената PCR и ELISA, единственото условие е липсата на възможност за пушене на пациента преди процедурата.
По отношение на характеристиките, получени от изследването на данните, повишеното натоварване се характеризира с показатели от 800000 IU / ml, ниско - 400000 IU / ml. Наличието на вирус в тялото на пациента се индикира чрез PCR за хепатит не е отрицателен качествен тест.
Този вид изследване позволява да се определи колко опасен е пациентът към хората около него. Например, идентифицирането на високо ниво показва повишена инфекциозност на пациента. В допълнение, резултатите от анализа помагат да се формулира по-нататъшното най-ефективно лечение и да се определи до каква степен съществуващата терапия се счита за ефективна.
Бързият отрицателен отговор на тестовете показва успеха на избраната техника, а бавната показва необходимостта от корекции и използване на мулти-лечение.
Процесът на вземане на аналитичната процедура зависи от конкретния ден от хода на заболяването. Първото определяне се извършва на първия ден след като пациентът е приет в болницата, след което процедурата се повтаря на 4, 12 и 24 седмици след приема на лекарствата.
Така количественият анализ показва коя терапия е най-ефективна, продължителността на наличната терапия и опасността на пациента по отношение на други хора.
определяне на генотипа
При изследването на материалния анализ е важно да се определи точността на генотипа на вируса, който се осъществява. В момента има 11 разновидности на вируса на хепатит С, които от своя страна включват определени подвидове.
Всички тези видове реагират по различен начин на различни лечения, като отделните сортове са абсолютно устойчиви на много лекарства.
Генотипът позволява да се определи и покаже състоянието на черния дроб. Не е необичайно резултатите да се „не типизират” в резултатите, което означава, че вирусът в кръвта на пациента не се открива от тази тестова система. Това може да бъде открито, ако определен генотип не съвпада с тази зона. В такава ситуация анализът се взема многократно и се използва по-чувствителна система за изследване на материала.
Ултрачувствителен метод
Ултрачувствителният метод е необходим в някои случаи, когато диагностицирането на хепатит не може да се осъществи по други методи, като в същото време, кога да се премине към анализ се определя от лекуващия лекар:
- ако подозирате наличието на вирус на хепатит С при пациенти със скрито разнообразие на заболяването;
- наличието на антитела срещу вируса на хепатит С, непотвърдени чрез PCR диагностика;
- с цел да се определи качеството на ефективността на избрания метод на лечение и да се потвърди елиминирането на заболяването.
Чувствителността на този метод е много по-висока от обичайно използваната, но този метод не изключва получаването на фалшиви резултати, както положителни, така и отрицателни. В такава ситуация е важно да се контролира качеството на процедурата и възможността за замърсяване на самия материал.
Обяснение на PCR анализа
Декодирането на анализа се извършва на базата на представените материали, а резултатите от лабораторните изследвания включват определени данни, описани по-горе.
Транскриптът може да включва положителна PCR полимеразна верижна реакция и отрицателен ELISA в анализа, което означава, че пациентът няма признаци на хепатит С в кръвта, но в миналото е прехвърлил острата форма на заболяването. Като правило при диагностициране специалистите прибягват до използването на PCR тестове.
Обобщавайки всичко изложено по-горе, може да се заключи, че по време на анализа е важно да се спазват всички правила и препоръки, така че получените резултати да са възможно най-точни и на базата на получените данни е възможно да се определи ефективността на използваната терапия и по-нататъшната възможност за пълно възстановяване.
Качествен анализ за хепатит С
8 март 2017, 12:29 Експертни статии: Нова Владиславовна Извчикова 0 10,547
Качествен анализ на полимеразната верижна реакция - PCR за хепатит С определя наличието или отсъствието на HCV в организма. В лабораторни условия се изследва структурата на РНК, която ще включва вируса. В случай на откриване на вируса С е необходимо да се подложи на курс на лечение, тъй като пренебрегнатото състояние на черния дроб ще доведе до тежки последствия. Висококачествената PCR се извършва след възстановяване, за да се потвърди отсъствието на антитела. Назначен и за рутинна инспекция. При ниска концентрация на причинителя в кръвта, PCR (качествена) може да не открие нищо, тъй като диагностичната система има собствени прагове на чувствителност. В случай на начален стадий на заболяването или лека форма, PCR се извършва чрез ултрадиагностика на ултра-чувствително оборудване.
Какво е РНК вирус?
Терминът РНК на вируса на хепатит С (или РНК на вируса на хепатит С) е самата болест на черния дроб. Вирус С се свързва със здравата клетка на тялото чрез проникване вътре. С течение на времето, разпръснати из цялото тяло, е необходимо само да влезе в кръвта. В резултат на това патогенът прониква в черния дроб, слива се с клетките си и работи усилено. Чернодробните клетки (хепатоцити) работят под негово влияние, претърпяват промени и от това умират. Колкото по-дълго вирусът С е в черния дроб, толкова по-голям брой клетки умират. С течение на времето се развиват опасни заболявания, водещи до злокачествена дегенерация и смърт.
Инфекцията на черния дроб с този вид вирус може да не се прояви външно. В продължение на много години или десетилетия заразен човек се чувства напълно здрав и само случайно изследване най-често разкрива патология. Когато се дарява кръв за хепатит, се изследва част от веригата РНК (рибонуклеинова киселина), която е част от човешкия ген (ДНК). Резултатите от лабораторните тестове не трябва да се използват за самолечение, защото това е само индикатор. Точната картина и по-нататъшната диагноза се определят по-добре от лекаря.
Когато е направено: индикации за изследване
В потвърждение на HCV се извършва PCR анализ (полимеразна верижна реакция). PCR проучванията помагат за намиране на причинителя в структурата на РНК и предписват ефективна терапия. Назначава се в следните случаи:
- откриване на признаци на възпаление на черния дроб;
- скринингови проучвания за превенция;
- изследване на контактни лица;
- диагностика на хепатит със смесен произход (определяне на основния патоген);
- определяне на нивото на репродуктивната активност на вируса в хронична форма;
- цироза на черния дроб;
- да се определи ефективността на предписаното лечение.
Има качествен и количествен анализ на PCR. Количествената PCR показва процента на РНК с носители на вирус в кръвта и качествено показва вирусното присъствие или отсъствие. Положителният показател за качество (присъствие на хепатит С РНК) също се нуждае от количествено изследване. Високото ниво на концентрация на причинителя на хепатит С е свързано с риска от неговото предаване, т.е. инфекция на други. Ниските числа са по-добре лечими. Количеството на РНК вирусите в кръвта не е свързано с интензивността на заболяването. PCR анализът се извършва също и в случай на интерферонна терапия, за да се предпише продължителността и сложността на курса на лечение.
Характеристики на висококачествения PCR анализ за хепатит С
На всеки качествен анализ е даден индикатор за полимеразна верижна реакция за всички пациенти, които имат антитела срещу хепатит С в кръвта си. Препоръчва се да се направи анализ за хепатит В, след това, в случай на положителен изход и за хепатит D. Също така, качествено анализираната реакция трябва да се извърши заедно с други кръвни тестове. Анализите ще покажат пълна картина на разпространението на вируса.
От резултатите от теста ще бъде видим или отрицателен само положителен тест за хепатит С, т.е. наличието или отсъствието на вирус. Ако изходът е "открит", тогава вирусът е и продължава да бъде активен. Обозначението "не е открито" показва липсата на вирус или неговото малко количество. С този показател трябва да се има предвид, че аналитичната чувствителност на диагностичните системи е различна и че РНК хепатит С може все още да е в кръвта, но не се проявява в анализа.
Особено чувствителен метод на PCR показва ултра хепатит С дори и в малки количества. Използва се изследване на флуоресцентна хибридизация, което е многократно по-високо от стандартните PCR системи. Методът се използва в няколко случая:
- подозирани скрити форми на хепатит С;
- PCR диагностиката не потвърждава патогена, но има антитела;
- в случай на възстановяване;
- за откриване на ранна инфекция.
Декодиращ анализ
PCR декодирането на HCV влияе на крайното решение, когато се поставя диагноза, по-специално с ултраметодния метод. Основният недостатък на това изследване е стриктното спазване на стерилните условия за пробата и материалите. Леко отклонение понякога показва неточни аналитични заключения, усложнява диагностиката и последващото лечение. Анализ на PCR за определяне на хепатит RNA не винаги уверено показва картина на заболяването, понякога са позволени неточности и в двете посоки.
Диагностициране на вируса на хепатит, се препоръчва да се използва цялостен преглед.
Норма на показателите
Отсъствието на JgM антитела срещу вирусен хепатит С в резултатите от изследването се счита за норма при анализа на полимеразната верижна реакция. В същото време констатациите от серологичния анализ показват наличието на антитела срещу вирус С и това също е в нормалните граници. Една качествена дефиниция не показва интензивността на заболяването, а само разкрива причинителя на хепатит С в РНК. Този анализ се повтаря след третиране, за да се потвърди действителното възстановяване.
отклонения
Ако са налице JgM антитела към HCV РНК, това показва развитие на инфекция. Заболяването в същото време протича остро или хронично, проявявайки се на различни етапи. Ако се регистрира намаляване на броя на антителата, анализът показва, че резултатите от лечението са постигнати по време на възстановяването. Има изключително редки случаи на фалшиво положителни резултати в диагностиката. Те се срещат при жени по време на бременност и при хора с други инфекциозни заболявания.
Диагностика с PCR за хепатит С
Не всички знаят защо използват PCR диагностичния метод за хепатит С. Една от най-често срещаните групи заболявания са инфекциозни заболявания на стомашно-чревния тракт. Най-често са засегнати стомаха (язви), червата (колит, ентерит) и черния дроб (хепатит).
Сред всички изброени по-горе органи, най-голямата тежест се налага върху черния дроб. В тялото ролята на черния дроб е изключително важна:
- Почти всички метаболитни реакции се извършват в черния дроб (това е мястото, където се формират всички видове жизненоважни компоненти, които позволяват на тялото да функционира напълно).
- Черният дроб е основният детоксикационен орган. С негова помощ (по-специално чрез жлъчката) се отстраняват много субстрати, които могат да причинят интоксикация и да доведат до сериозни последствия.
За съжаление много хора не следят здравето си, поради което черният дроб започва да страда. Обикновено се развиват хепатити с различна етиология (вирусни, токсични).
Определение за хепатит
Вирусният хепатит заема важно място сред чернодробните заболявания. Тежестта на хода на заболяването, сложността на лечението ги поставя на първо място сред патологията на другия характер на този орган.
Всички хепатити се разделят на остри и хронични. Хепатит А и В са класифицирани като остри, като сред хроничния хепатит С е на първо място.
Това заболяване е причинено от вируса на хепатит С. Характерна особеност е, че болестта може да продължи дълго време без никакви клинични прояви.
Предава се главно чрез кръвта. С притока на кръв, вирусът навлиза в черния дроб, където започва да се размножава в клетките си. В резултат на натрупването на вирион, настъпва разрушаване на заразения хепатоцит. В отговор на това започват да се произвеждат антитела, които започват да атакуват остатъците от хепатоцитите. Поради това с течение на времето се развива басейн срещу чернодробни клетки, което влошава хода на заболяването.
Поради факта, че заболяването е леко асимптоматично или асимптоматично, и клиничните признаци се появяват само когато клетките са значително засегнати, това заболяване изисква създаване на диагностични методи за откриване на присъствието му и предприемане на подходящи мерки.
Диагностика на хепатит С: качествени и количествени анализи
Понастоящем за диагностициране на хепатит С се използват методи като чернодробна биопсия и имунограма.
Те позволяват директно да се определи наличието на заразени хепатоцити (чернодробна биопсия) или специфични антитела срещу засегнатите клетки (имунограма). Въпреки това, съществува метод, който ви позволява надеждно да определите присъствието на самия вирус. Това е PCR - полимеразна верижна реакция.
Същността на този метод се състои в това, че при определени условия се получава производството на вериги РНК. Това се дължи на факта, че има фрагменти от вирусна частица в кръвта или въпросната биопсия. При свързването им с някои молекули в средата настъпва синтез на вериги, допълващи се с вирусна РНК. При последващия им анализ и сравнение с известната нуклеотидна последователност на вируса на хепатит С е възможно да се определи дали вирусът присъства в тялото и дали е налице увреждане на черния дроб.
PCR се извършва след откриване на специфични антитела срещу вируса на хепатит в кръвта. След провеждане на теста резултатът - РНК се “открива” или “не се открива”. Понякога той може да каже "недостатъчно материал" - в този случай е необходимо повторно тестване за хепатит С.
Ако броят на вирусните частици е по-малък от изискваното минимално количество, тогава можем да кажем, че няма хепатит и минималните количества генетичен материал могат да бъдат „объркани” поради мимикрия на генетичен материал или някои нуклеотидни последователности, които могат да съвпаднат с вируса.
- При PCR може да се наблюдава отрицателен резултат, когато наистина има вирусни частици в кръвта, но те са толкова малки (наскоро настъпила инфекция или преди анализът е предшестван от продължителна и интензивна антивирусна терапия), че тестовата система просто не може да определи нормално концентрацията им. РНК - "не е открита".
- Ако PCR има положителен резултат, тогава има толкова много вирусни частици в кръвта, че техният брой надвишава по-ниския праг на чувствителност на тестовата система. В този случай съществува висок риск от развитие на инфекциозен процес (или вече е налице в доста напреднал стадий). Обикновено голямо количество вирус вече е индикация за лечение и последваща трансплантация на черния дроб.
Понякога тестът може да стане фалшиво положителен или фалшиво отрицателен.
Наблюдава се фалшиво отрицателен PCR резултат на хепатит в случая, когато някои компоненти присъстват в реакционната среда, които инхибират образуването на копия на вирусната частица. Поради това не е възможно да се получи истинска картина на състоянието на кръвта, която допринася за преминаването на вируса и прогресирането на заболяването. Наличието на хепарин в кръвта също може да повлияе на реакцията (чрез намаляване на относителния вискозитет на кръвта). Неправилно тълкуване на анализа е възможно дори когато условията за транспортиране и съхранение на разследвания материал не са изпълнени.
Фалшиво положителни резултати, когато се диагностицира хепатит С, PCR най-често се получава, когато тръбата или работната среда са заразени. В допълнение, положителни резултати могат да бъдат наблюдавани с наличието на вируси на хепатит от други групи (поради кръстосана реакция).
Качествен анализ на PCR за откриване на хепатит С
Наличието в кръвта на голям брой криоглобулини също пряко влияе на провеждането на PCR. Поради това е наложително да се определи тяхната концентрация в кръвта преди тестването за хепатит С, за да се открие предварително нарушение на резултата и да се предотврати това.
След тези тестове става ясно дали има вирусни частици в кръвта. При определянето им се препоръчва незабавно да започне антивирусна терапия, за да се забави развитието на процеса. За разлика от хепатит В, няма пълно излекуване за хепатит С; болестта преминава само в латентния стадий и започва да действа по-бавно. Увреждането на черния дроб е неизбежно. На последния етап от процеса, когато черният дроб вече не може да се справи с функцията си, той може да изисква неговата трансплантация.
Лечението се извършва основно с два лекарства - интерферон и рибавирин.
Доказана тяхната ефективност при забавяне на процеса на поражение на хепатоцитите. По пътя, инфузионната терапия е задължително предписана, за да се улесни работата на черния дроб.
Всички пациенти, които са видели увеличение на броя на вирусните частици в кръвта, са задължително регистрирани при хепатолог. Няколко пъти в годината се препоръчва да се извърши профилактичен преглед, за да се определи развитието на процеса и навременното откриване на показания за трансплантация. Освен това е възможно да се използват хепатопротектори, въпреки че мненията на лекарите се различават до известна степен. Някои смятат, че тези лекарства ви позволяват да спрете процеса и да защитите все още незасегнатите хепатоцити; други са убедени, че няма смисъл да ги приемат и трябва да се проведе интензивна антивирусна терапия.
По този начин хепатит С принадлежи към категорията на болестите, чието идентифициране създава известни затруднения. Подобряването на диагностичните методи, както и навременните превантивни прегледи ще намалят честотата на това заболяване. Също така е важно да се предотврати това заболяване. Трябва внимателно да се избягва контакт с кръвта, да се отказват от наркотици, едва тогава болестта ще бъде ликвидирана. Основното в превенцията и лечението е съзнателното отношение на пациента към здравето си.
Провеждане на PCR анализ за хепатит С и декодиране на резултатите
PCR анализът на хепатит С е изследване, чиято основна цел е да идентифицира генетичния материал на причинителя. Анализът разкрива причинителя на заболяването чрез използване на полимеразна верижна реакция. Тази диагноза има висока степен на точност, специфичност за откриване на липсата или наличието на вирусна инфекция.
Същността на диагнозата
За да се извърши PCR анализ за определяне на вируса на хепатит С от пациент, се взема венозна кръв, която потенциално съдържа РНК (рибонуклеинова киселина) HCV на желания вирус.
PCR тестът за хепатит С предполага процедура за добавяне на кръвните частици на пациента:
- праймери (кратки изкуствено синтезирани региони на необходимия ген);
- специален ензим (РНК полимераза).
След вземането на проби биологичният материал се изпраща за изследване в лабораторията. Една порция кръв е необходима за директен PCR анализ, втората е изпратена за тестване с ELISA. Ензимът може за кратко време да увеличи броя на генетичния материал на вируса на патогена. В специална апаратура се извършват няколко цикъла на топлина и охлаждане. На последния етап полученият материал се сравнява с гените на вируса и се прави заключение за наличието или отсъствието на патология в тялото на пациента.
Същността и провеждането на PCR анализ в лабораторията. Заснет от Сибирска медицинска лаборатория.
Видове изследвания
Има 3 вида диагностика, които позволяват да се определи наличието на вируса на хепатит С в човешкия организъм:
- на генотип;
- на качеството;
- количествен.
Качествен метод
Диагностика на хепатит С с качествен метод е приложима за пациенти, при които са открити антитела към вируса в кръвния тест. В случай на наличие на острата фаза на HCV РНК, такива диагностични мерки могат да определят наличието на заболяването в рамките на 1-2 седмици след инфектирането. През този период може да не се развият антитела срещу хепатит С.
Количествен метод
Използва се количествен диагностичен метод за определяне на концентрацията на вируса в кръвните проби. Такъв тест за виремия (степен на концентрация) позволява точно да се определи броят на единиците вирусна РНК. Крайният резултат се изразява в съответния обем. Ако говорим за количествен анализ, тогава показателите се измерват в 1 мл (1 куб. М).
Параметърът на вирусното натоварване означава нивото на инфекциозност на заболяването, т.е. той отразява степента на "инфекциозност" на пациента. На практика това означава, че колкото по-висока е концентрацията на вируса в кръвта, толкова по-големи са шансовете на пациента да зарази други с хепатит С. Количествен метод за изследване също ви позволява да установите качеството и ефективността на лечението.
определяне на генотипа
Генотипирането разкрива мутации на причинителя на заболяването. Преди да предпише план за лечение, се определя вирусният генотип: от него зависи качеството и продължителността на лечението. Например, при лечението на I-тип заболяване, ефективността е 60%, в случая на II, III-тип - около 80%.
Предимства на PCR анализа на хепатит
Сред основните предимства на процедурата са:
- Възможността за ранна диагностика. PCR анализът е в състояние да открие наличието на вирус в ранните стадии на инфекцията.
- Резултати с ниска грешка. Изследваният биологичен ресурс ви позволява да диагностицирате раздел от генетичен материал, който е характерен само за един вид вирусна инфекция. Това обстоятелство позволява да се предотвратят грешни диагностични резултати.
- Висока степен на чувствителност. PCR анализът е в състояние да открие РНК на вируса в малки количества, което също прави възможно да се проследят латентните инфекции във времето.
Показания за
Необходимо е тестване за PCR за хепатит С, ако е налично:
- контакт с болни хора, което може да доведе до инфекция;
- симптоми на чернодробна цироза (разширяване на далака, нехарактерни промени в размера на черния дроб, откриване на венозен сплит на корема под кожата);
- положителни резултати от ELISA;
- повишена активност на AST и ALT (проявена в биохимичния анализ на кръвта);
- необходимостта да се контролира провеждането на антивирусна терапия;
- началния етап на лечение за необходимостта от установяване на вирусен товар;
- провеждане на последния етап от терапията с цел изключване на възможни рецидиви;
- пациентът има хепатит В, за да изключи развитието на смесено увреждане на черния дроб.
Как да се подготвим за кръводаряване за PCR изследвания
Подготовката за PCR анализ включва следните препоръки:
- сутрин се взема кръв;
- анализът се извършва на празен стомах, така че е препоръчително да се направи почивка между последния прием на храна от 8-10 часа;
- няколко дни преди диагнозата трябва да бъдат изключени мастни, пикантни и пържени храни, алкохолни напитки и пушене;
- един ден преди анализа трябва да се въздържат от тежки физически натоварвания, да се изключат занятията във фитнеса или басейна.
Резултати от анализа: норми и отклонения
Самият анализ не е дългосрочен, а висококвалифицираният специалист хепатолог или специалист по инфекциозни болести декриптира резултатите от PCR за хепатит С. Въз основа на резултатите от анализа пациентът се диагностицира.
За да се коригират правилно резултатите от проучването, те вземат предвид показателите:
- биохимичен анализ на кръв;
- данни от ултразвук;
- резултати от биопсия.
Интерпретация на количествения анализ
При получаване на резултатите от количествения анализ на PCR се вземат предвид следните показатели:
PCR метод за откриване на хепатит С
PCR е полимеразна верижна реакция, която се използва за определяне на присъствието на хепатит С в серума.Резултатът може да бъде положителен и отрицателен.
Предимствата на PCR метода
Този диагностичен метод има следните предимства:
- Методът PCR позволява да се определят следните резултати:
- присъствието на РНК вирус;
- степен на радиация;
- оригинална генетична информация;
- уникалност и уникалност на генетичните данни.
- Можете да използвате всички необходими клинични материали:
- кръв;
- плазма;
- урина;
- телесни течности и екскрети;
- слюнка и други.
- Позволява да се определи в кръвта на повече от един микроорганизъм наведнъж, за разлика от други проби.
- Получаване на резултати в рамките на 24 часа.
- Опростени методи за съхранение и транспортиране на анализ, патогени се определят дори в мъртва среда.
- Уникалността на PCR ви позволява да идентифицирате някои микроорганизми, които не са податливи на друга проба.
- Висока степен на чувствителност на реактивите, тестът е най-точен от този вид.
Характеристики на качествения анализ на PCR
Извършва се качествен тест, за да се определи наличието на вирус в кръвта и да се получи отрицателен или положителен резултат.
Показанието за този тип диагноза е откриването на антитела срещу хепатит С в тялото на пациента.
Възможни резултати:
- открито (положително);
- не е открит (отрицателен).
Качествен тест не е подходящ за пациенти с много ниско съдържание на вирус в кръвта, така че той има определена чувствителност.
Резултатът „е открит“
Откриване на вируса на хепатит С може да бъде няколко седмици след заразяването на тялото, дори и при липса на антитела към този патоген. Този резултат показва наличието в организма и кръвната група на фрагмент от РНК, характерен за хепатит С.
Пациентът се счита за заразен с този вирус и претърпява допълнително разпространение на патогенни клетки в организма.
Резултатът „не е открит“
Този вариант предполага, че в изследваната проба от биологичен материал няма РНК фрагменти, специфични за хепатит С. Това е отрицателен резултат.
Чувствителността на теста не разкрива ниското съдържание на РНК фрагменти, така че неоткритият резултат не винаги е правдоподобен.
Характеристики на интерпретацията на резултатите
Основната характеристика на интерпретацията на резултатите е праговата чувствителност на PCR метода.
Това зависи от следните показатели:
- точност на изследването;
- вида и качеството на използваното оборудване.
Отбелязва се, че чувствителността може да варира между 10-500 IU / ml. От това следва, че ако в тялото на изследвания пациент присъства вирус в концентрация по-малка от 10 IU / ml, тестът ще покаже резултатът "не е открит". Но това не означава, че патогенът напълно отсъства.
Варианти на диагностичните системи
В момента има следните опции за диагностични системи:
- Ако се вземе кръв от пациент, подложен на антивирусно лечение, трябва да се използват диагностични системи с чувствителност най-малко 50 IU / ml. За тази цел се използват следните анализатори:
- Cobas Ampicolor HCV-тест;
- RealBest РНК на HCV.
- За да се постави окончателната диагноза "Хепатит С", е необходимо да се открие РНК вирусът в три различни проби от биологични материали. Тези препоръки са разработени от Световната здравна организация. Ако резултатът е три пъти отрицателен, диагнозата не се потвърждава.
- В момента, в допълнение към PCR метода, има по-точен тест, наречен TMA (метод на транскрипционна амплификация). Неговият праг на чувствителност е много по-висок, отколкото при други методи за диагностика.
Обхватът на откритите модификации на вируса
На този етап от генетичното развитие са известни няколко вида и варианти на вирусна модификация.
Лабораторната диагностика у нас с абсолютна точност може да определи следните генотипи:
Характеристики на PCR количествен анализ
Количественият анализ е определението на вируса на хепатит С в човешкото тяло. По време на проучването, РНК и вирусният товар в изходния материал се определят чрез PCR. В противен случай можем да кажем, че тестът ви позволява да определите колко вирусни клетки са в биологична течност. За този тип изследване се използва само венозна кръв. Няма специфична подготовка на теста.
Количественият анализ ви позволява да наблюдавате на стадия на лечение вече започнато и да оцените неговата ефективност. За оценка се правят тестови данни преди и по време на терапевтичните интервенции. С получените резултати е възможно да се предвиди хода на заболяването.
С успеха на избрания метод на лечение след 3 месеца, количеството на РНК трябва да намалее няколко пъти. Според препоръките, количественият анализ се извършва след един, а след три и шест месеца. Последният резултат с успеха на лечението трябва да бъде отрицателен.
Оценка на резултатите от количествения PCR тест
В нашата страна има 2 възможни варианта за оценка на резултата от количествен PCR тест:
- броя на копията на милилитър биологична течност;
- броя на международните единици на милилитър.
За получаване на международни единици броят на копията се разделя на 4.
- високо с PCR над 800,000 IU / ml;
- ниска с PCR под 400,000 IU / ml.
Резултатът от количествения тест осигурява 2 опции:
- "Под обхвата на измерване";
- „Не е открито“ (отрицателно).
Рейтинг: „под диапазона на измерване“
Такова заключение се прави, когато количествен РНК тест не открива причинителя на хепатит С в клетъчния изходен материал, но вирусът все още присъства в кръвта. Надеждността на анализа се потвърждава от качествения метод, тъй като прагът на чувствителност на количественото изпитване може да не установи малки стойности и концентрации на патогена.
Оценка: „не е открито“
Подобен извод се прави, когато РНК вирусите на хепатит С не са открити в изходния материал по време на диагнозата, което е отрицателен резултат.
Интерпретиране на резултатите от анализа на количествения PCR тест
Използването на индикатора за вирусен товар определя:
- степента на пренебрегване на болестта;
- колко заразен е пациентът;
- ефективността на антивирусната терапия.
Колкото по-висока е степента на вируса на хепатит С в организма, толкова по-опасен е пациентът за други хора и по-прогресивно заболяване.
Хепатит С PCR е важен диагностичен метод, особено по време на терапевтични интервенции. Благодарение на получените отрицателни или положителни резултати е възможно да се оцени тяхната ефективност, напълно да се излекува пациентът или да се скъси времето за лечение.
PCR анализ за хепатит С
За диагнозата "хроничен вирусен хепатит С (CVHS)" се изисква цялостно изследване на лицето, което включва клинични, лабораторни и инструментални изследвания. Важно от гледна точка на диагнозата за правилната диагноза е PCR методът - полимеразна верижна реакция.
Какво показва този анализ и защо е необходимо?
Този лабораторен метод открива РНК на вируса на хепатит С в човешката кръв. Заедно с ензимно-свързания имуносорбентен анализ (ELISA) за антитела към вируса, PCR се използва за поставяне на диагноза на CVHC и неговия патогенен генотип. Това изследване е един от най-новите методи за лабораторна диагностика. Неговата надеждност при CVHS надхвърля 97%, което се счита за много добър показател за научни изследвания.
Има три PCR кръвни теста за CVHS: качествено, количествено и генотипизиране на вируса. Първото проучване (качествен анализ) на вируса го открива в кръвта и затова се използва само за диагностика.
Второто (количествено) изследване определя степента на вирусно натоварване на организма, следователно се използва за наблюдение на ефективността на терапията.
Третият PCR (генотипизиране) изяснява диагнозата, установявайки генотипа на вируса, което е много важно за назначаването на правилно антивирусно лечение.
Същността на полимеразно-верижната реакционна техника е използването на ензими, които умножават генетичния материал на патогена в биоматериала. В процеса на такава репликация тръбата с кръв се нагрява няколко пъти и се охлажда до температурата, необходима за ускоряване на ензимната реакция. В резултат на тези манипулации, количеството на вирусния геном се увеличава многократно, което позволява да бъде открито дори с минимално количество.
PCR диагностиката има много предимства пред другите лабораторни тестове:
- висока чувствителност - 97-98%;
- гарантирана аналитична специфичност (разкрива точно патогена, който искате да намерите, а не неговия свързан щам);
- скорост на провеждане (отнема не повече от 2 дни, за да се получи заключение).
Три вида PCR анализи
Висококачествен PCR анализ се възлага на всички пациенти, при които ELISA анализът открива антитела към вируса на HVGS. След провеждане на висококачествена PCR могат да се получат две опции за отговор: "РНК се открива" или "РНК не се открива". За да се установи минималното количество вирус в кръвта, са необходими тестови системи с чувствителност най-малко 50 IU / ml. Ако концентрацията на вируса в кръвта на пациента е по-малка, отколкото диагностициумът може да определи, резултатът от проучването може да бъде фалшиво отрицателен. За да се избегне подобна диагностична грешка, лабораториите, извършващи PCR диагностика, трябва да бъдат снабдени с високо чувствителни тестови системи. В лабораторията "Invitro", например, се използват тестове с чувствителност от 15 IU / ml. Лабораторните работници са задължени да предоставят информация за чувствителността на тестовете на пациентите и лекарите при първото им искане.
Количественият анализ на PCR определя степента на виремия, т.е. концентрацията на патогена в кръвта, вирусния товар. Резултатът от това изследване, за разлика от висококачествената PCR, се изразява в числа, например 2 × 10 * 6 IU / ml, което означава 2 милиона международни единици в 1 ml кръв. Някои лаборатории използват друг индикатор - броя копия / ml. Тези два индикатора са лесни за преобразуване: 1 международна единица се равнява на 4 копия на РНК. Така, 2 х 10 х 6 IU / ml ще означава, че 8 х 10 х 6 копия на вирусна РНК в 1 ml, т.е. 8 милиона копия в 1 ml кръв.
Генотипирането е дефиницията на един от шестте генотипа на вирус. Клиничната картина, степента на развитие на усложненията на черния дроб и прогнозата за бъдещия живот на пациента зависят от генотипа на причинителя. Генотипът на вируса е много важен още на етапа на диагностициране, тъй като комбинацията от лекарства и продължителността на терапевтичния курс, които трябва да се поставят на пациента, зависят от неговото правилно определяне.
Но дори и това привидно „перфектно“ лабораторно изследване има своите недостатъци:
- проучването възпроизвежда генетичния материал на всички патогени, дори неживи, които могат да нарушат резултата. Следователно, за да се следи ефективността с помощта на PCR, повторният анализ се извършва не по-рано от 2 месеца след предходния, така че мъртвите вируси да могат да „напуснат” тялото на пациента;
- част от вирусния геном, която се определя чрез тестови системи, теоретично може да присъства в други вируси или микроорганизми, така че има възможност за фалшиво положителен отговор;
- вирусите мутират бързо. Понякога скоростта и степента на вирусна мутация са толкова високи, че тестовата система спира да улавя генома им. В резултат на това е възможен фалшиво отрицателен резултат.
За изравняване на тези недостатъци производителите на лабораторни тестови системи за PCR диагностика постоянно провеждат тестовете си, включително кръстосани реакции и чувствителност към определен генотип на вируса.
Как да направите PCR тест за хепатит С?
За да бъде заключението на PCR изследването надеждно, е необходимо стриктно да се спазват правилата за подготовка за него:
- изследването се провежда на празен стомах (глюкоза, мазнини, минерали, които влизат в кръвта от храната, могат да повлияят на скоростта и качеството на ензимната реакция);
- разликата между последното хранене и вземането на кръвни проби за анализ трябва да бъде най-малко 8 часа;
- в навечерието на изследването е забранено да се приема алкохол и да се консумират мазни храни, периодът на елиминиране на който е удължен;
- ден преди да отидете в лабораторията трябва да избягвате силен физически и емоционален стрес;
- до момента на вземане на кръвни проби не се препоръчва да се пуши.
За да се избегне появата на неверни заключения, предполагаемият пациент трябва да дойде в лабораторията малко по-рано от вземането на кръв. Отнема 15-20 минути, за да може човек да си поеме дъх, да се успокои. Адреналинът, който присъства в кръвта след бърза разходка, може да повлияе на резултата от изследването.
Ако пациентът, отнесен за анализ, приема някакви лекарства, той трябва да уведоми лекаря за това. Възможно е някои от тях да бъдат отказани за известно време (ако е възможно).
Резултатът от анализа на PCR за хепатит С
Декодиране на резултатите от лабораторния лекар на лабораторията, която е извършила анализа. Декодирането е определянето на отклонението на резултата от нормата. Скоростта на индикаторите се определя директно от производителя на тестовата система, която се използва от лабораторията за диагностика. Следователно, не е изненадващо, че в някои лаборатории вирусният товар се определя в IU / ml, а в други в копия / ml.
След като получи заключението, е необходимо да можем да го тълкуваме правилно. Лечението на резултатите от изследването трябва да се извърши от лекуващия лекар на пациента с хепатит С. Само след обективно, инструментално и лабораторно изследване на пациента, лекарят може да получи достатъчно количество данни за правилна интерпретация на получените PCR резултати.
Оценката на качествения анализ, като правило, не предизвиква затруднения дори при пациентите. Резултатът може да бъде само един: "detected" или "not detected". В този случай втората от тях е норма.
Показателите за количествен анализ са по-трудни за тълкуване. Той показва степента на вирусно натоварване на пациента. Дори сред хепатолозите няма консенсус за това как да се лекува откритата виремия. Повечето лекари са склонни да смятат, че трябва да се обмисли високо натоварване от повече от 8 × 10 * 5 IU / ml. Натоварване, по-голямо от 1 × 10 * 7 IU / ml, се счита за много високо, докато ниското натоварване е по-малко от 4 × 10 * 5 IU / ml.
Степента на вирусно натоварване показва вирулентност (агресивност) на вируса: колкото по-голямо е количеството му в кръвта, толкова по-бързо се развиват усложненията на черния дроб. Високата концентрация на вируса в кръвта на бременна жена увеличава вероятността от проникване през хематоплацентарната бариера към плода. Виремията също влияе върху ефективността на лечението: при ниски цифри ефективността на терапията е по-висока, отколкото при високите.
За да бъдем уверени в точността на анализа на PCR за хепатит С, е необходимо да се даде предимство само на онези лаборатории, които са добре доказани. Ценовата политика в този случай не трябва да играе основна роля.
PCR проучване върху хепатит С: видове, показания, транскрипт
Вирусният хепатит С е сериозно заболяване, което се проявява при увреждане на черния дроб. При осемдесет процента от пациентите тя става хронична. Вирусът се размножава в чернодробните клетки - хепатоцити - и причинява смъртта им. Мъртвата тъкан се заменя с огнища на съединителната тъкан, развива се фиброза.
Тъй като фиброзата се развива, черният дроб не може да изпълнява функциите си, започва цироза на черния дроб, което е опасно за неговите усложнения: повишено налягане в системата на порталната вена, стомашно-чревно кървене, нарушена коагулация на кръвта, психични промени, дължащи се на увреждане на мозъчните ядра от токсични продукти.
Причината за заболяването е инфекция от вирус от семейство Flaviviridae, който принадлежи към вида на РНК вирусите. Това означава, че генетичният материал, чрез който се синтезират протеините на патогена, се кодира в молекулата на рибонуклеиновата киселина. Инфекцията възниква чрез кръв, полово и от бременна жена към плода. За съжаление, достатъчно голямо количество време може да премине между инфекцията и началото на производството на антитела - от две седмици до шест месеца. Това не позволява да се определи инфекцията чрез ELISA и да започне лечението на ранен етап.
Какво е PCR анализ?
PCR е метод на молекулярния анализ, който позволява да се открие генетичният материал на патогена още през първата седмица след заразяването с помощта на полимеразна верижна реакция. Проучването има висока специфичност, точност и позволява не само да се определи наличието или отсъствието на вируса, но и неговата концентрация и генотип.
За изследването се взема кръвта на пациента, в която потенциално може да бъде разположена вирусната РНК. Праймерите се добавят към кръвта - изкуствено синтезирани региони на желания ген с малка дължина, а РНК-полимеразата е специален ензим, който многократно увеличава количеството на генетичния материал на патогена. С помощта на специална апаратура се извършват няколко цикъла на отопление и охлаждане. След това материалът се анализира и сравнява с известни гени на вируса, въз основа на което се прави заключение за наличието или отсъствието на инфекция.
Видове PCR анализ за хепатит С
Има три вида PCR анализ:
- Качествен анализ на PCR. Първият етап от изследването. Тя ви позволява да идентифицирате генетичния материал на вируса в кръвта.
Количествен анализ на PCR. Позволява ви да определите вирусния товар - концентрацията на генетичния материал на патогена в един милилитър кръв. Това проучване се провежда преди началото на терапията, а след това в първата, четвъртата, дванадесетата и (ако курсът е дълъг) на двадесет и четвъртата седмица от лечението, за да се оцени неговата ефективност.
Показания за PCR анализ за хепатит С
PCR изследването се предписва в следните случаи:
- контакт с болен човек, при който може да възникне инфекция;
- позитивен ензимен имуноанализ;
- признаци на цироза на черния дроб: промяна в размера на черния дроб, увеличена далака, поява на подкожен венозен сплит на корема;
- появата на симптоми на увреждане на черния дроб: болка в десния корем, пожълтяване на кожата;
- повишена активност на ALT и AST в биохимичния анализ на кръвта;
- преди започване на лечението да се определи вирусния товар;
- да наблюдава ефективността на антивирусната терапия;
- след лечение за контрол на рецидив;
- при наличие на диагностициран хепатит В, за да се изключи смесено увреждане на черния дроб.
Обяснение на PCR проучвания върху хепатит С
Декодирането на PCR анализ и ензимен имуноанализ за хепатит C трябва да се извършва от специалист по хепатолог или инфекциозни болести. Анализирането на резултатите от PCR е необходимо в комбинация с данните от биохимичния анализ на кръв, биопсия и ултразвук. Само квалифициран лекар ще може да анализира резултатите от изследванията и въз основа на тях да предпише правилното лечение.
Декодиране на качествен анализ.
В анализирания биологичен материал се намира генетичният материал на патогена. Инфекцията е потвърдена.
Инфекцията отсъства или количеството на патогенната РНК е под границата на чувствителност.
Декодиране на количествен анализ.
Нормален процент за здрави хора. Това означава, че тестовият материал не съдържа хепатит С РНК, или неговата концентрация е под прага на чувствителност на изследването.
Концентрацията на РНК е под количествения диапазон. Тези резултати се интерпретират много внимателно, съпоставят ги с данни от други проучвания, често повторно проучване.
Нивото на вирусния товар при дадена концентрация се счита за ниско. Обикновено намаляването на количеството на вируса означава, че терапията е успешна.
Повече от 8 * 10 ^ 5 IU / ml
Нивото на вирусен товар при дадена концентрация се счита за високо.
Повече от 2.4 * 10 ^ 7 IU / ml
Количеството на РНК е над горната граница на обхвата на количествено определяне. Не е възможно да се направят изводи за степента на вирусното натоварване с този резултат. Обикновено в такива случаи тестът се повтаря с разреждането на кръвна проба.
Декодиране на генотипиране.
Открита е РНК на специфичен генотип
Вирусът на хепатит С на определен генотип и подтип е открит в биоматериала. Резултатът се кодира с римски цифри и латински букви, например - 1a, 2b. Общо има седем генотипа и шестдесет и седем подтипа, но в Русия има само три първи типа.
Открива се РНК на вируса на хепатит С
РНК се открива в кръвта на рядък генотип за Русия, който не може да бъде приписан на първия, втория или третия тип. Необходими са повече изследвания.
Този резултат показва, че пациентът е здрав или че количеството на патогенната РНК е твърде малко.
Възможно е PCR анализът за хепатит С да е отрицателен, а ензим-свързаният имуносорбентен анализ да разпознава антитела срещу вируса. Това означава, че пациентът има остър хепатит С и се възстановява самостоятелно. Приблизително двадесет случая на инфекция водят до спонтанно възстановяване, ако тялото на пациента е достатъчно устойчиво на инфекцията.
Въпреки че PCR е много точен, неговите резултати могат да бъдат нарушени в следните ситуации:
- кръвта е транспортирана до лабораторията в неподходящи условия, температурата е нарушена;
- биоматериалната проба е замърсена;
- има остатъчни следи от хепарин и други антикоагуланти в кръвта;
- Установено е, че изследователите са инхибитори - вещества, които забавят или спират полимеразната верижна реакция.
Предимствата на PCR спрямо други методи
- Диагностика в ранните етапи. PCR открива генетичния материал на причинителя. Използвайки имунофлуоресцентен анализ, могат да бъдат идентифицирани само имуноглобулини - вещества, които организмът произвежда в отговор на инфекция. В случай на инфекция с хепатит С, разликата между инфекцията и началото на имунния отговор може да бъде няколко седмици и месеци, в този момент ELISA ще бъде неефективна. PCR ще даде отговор през първата седмица след заразяването.
Малка вероятност за грешка. В разглеждания материал се определя площта на генетичния материал, който е характерен само за един вид патогени. Това елиминира неверни резултати. Когато ELISA грешки са възможни, тъй като същият тип антитяло може да бъде освободен срещу различни вируси - такива антитела се наричат кръстосани антитела.
Как да се подготвим за кръводаряване за PCR изследвания
За PCR анализ на хепатит С се събира венозна кръв. Обикновено две части от кръвта се взимат от вената на пациента едновременно: първата се изпраща за PCR, а втората с ELISA. Това се прави, за да се оцени по-точно колко пациент е заразен с вирус и как се бори срещу него.
Обикновено от пациента се изисква да спазва следните правила:
- сутрин се прави кръвен тест;
- Интервалът между последното хранене и кръводаряването трябва да бъде от осем до десет часа;
- два или три дни преди анализа е необходимо да се изоставят пържени и мазни храни и алкохол;
- в продължение на двадесет и четири часа преди анализа пациентът трябва да избягва физическо натоварване: не носете тежести, не ходете във фитнеса или басейна.